Drug susceptibility of Salmonella paratyphi A in Yuxi, Yunnan
YAO Ying-bo, ZUO Shun-wu, ZENG Li-ping, LIU Hong-yan, KONG Li-xia, YANG Ru-song, WANG Shu-kun
Yuxi Center for Disease Control and Prevention, Yuxi 653100, Yunnan, China
Abstract
Objective To investigate the drug susceptibility trend of Salmonella paratyphi A (SPA) in Yuxi, Yunnan province, and provide evidence for the clinical use of antibiotics, patient treatment and eliminating infection source. Methods The K-B disk diffusion method was used to detect the drug susceptibility of 252 SPA isolates collected from 2005 to 2011 to 17 antibiotics. Furthermore, Etest test strip was used to test the minimum inhibitory concentration (MIC) of quinolones, including nalidixic acid, ciprofloxacin, levofloxacin and norfloxacin. Results The isolates were sensitive to ampicillin, amoxicillin, cephalothin, imipenem, netilmicin, sulfamethoxazole/trimethoprim and chloromycetin. The sensitive rate was 99.21% to cefotaxime, 98.41% to tetracycline, aztreonam and levofloxacin, 97.62% to nitrofurantoin, 95.63% to norfloxacin and 36.51% to ciprofloxacin. However, the sensitive rates to lomefloxacin and nalidixic acid were only 0.79%. All SPA isolates were resistant to rifampicin. The isolates’ intermediate rate to lomefloxacin declined with year, whereas the resistance rate increased with year. Moreover, the isolates’ intermediate rate to ciprofloxacin increased, but the sensitive rate decreased with year. Among 252 SPA isolates, 250 isolates were nalidixic acid resistant (NAR), the other 2 isolates were nalidixic acid sensitive (NAS). NAS isolates are more sensitive to the fluoroquinolones than NAR isolates, because the MICs of NAR isolates are much higher than those of NAS isolates (χ2=244.063,P<0.001). Conclusion Third generation cephalosporins could be used as the first choice in the treatment of Paratyphoid fever in Yuxi. The resistance of local SPA stains to fluoroquinolones is in increase, so the rational use of this antibiotic is important to stop the spread of their drug resistance.
云南省玉溪市甲型副伤寒沙门菌对抗生素的敏感性分析
姚颖波, 左顺武, 曾丽萍, 刘红雁, 孔丽霞, 杨汝松, 王树坤
玉溪市疾病预防控制中心, 云南 玉溪 653100
摘要
目的 了解云南省玉溪市甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A, SPA)对抗生素的敏感性及耐药趋势,为临床医生合理用药、有效治疗患者、清除传染源提供依据。 方法 采用纸片K-B法扩散技术检测玉溪市2005-2011年分离的252株SPA对17种抗生素的敏感性;并采用 Etest测试条进行喹诺酮类(萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星)抗生素最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定。 结果 分离株对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻吩、亚胺培南、奈替米星、复方新诺明、氯霉素7种抗生素均敏感;头孢噻肟的敏感率为99.21%;四环素、氨曲南、左氧氟沙星的敏感率为98.41%;呋喃妥因、诺氟沙星、环丙沙星的敏感率分别为97.62%、95.63%和36.51%;洛美沙星、萘啶酸的敏感率仅为0.79%,所有分离株对利福平耐药;分离株对洛美沙星的中介率逐年下降,耐药率逐年上升;对环丙沙星的中介率不断上升,敏感性不断降低。250株分离株属于萘啶酸抗性(nalidixic acid-resistant,NAR)株,其余2株属于萘啶酸敏感(nalidixic acid-sensitive, NAS)株, NAR株降低了对氟喹诺酮类药物的敏感性,NAR分离株MIC值远远高于NAS株的MIC(χ2=244.063, P<0.001)。 结论 第三代头孢菌素可作为玉溪境内治疗甲型副伤寒的首选药物;当地SPA对氟喹诺酮类抗生素耐药性呈上升趋势,合理应用该类药物,对遏制耐药性的进一步发展,具有十分重要的意义。
内容大纲
-
1 材料与方法
- 1.1 标本来源
- 1.2 方法
- 1.2.1 抗微生物药物敏感性试验
- 1.2.2 最低抑菌浓度
- 2.1 SPA分离株对抗生素的敏感性监测结果
- 2.2 SPA分离株的MIC
1 材料与方法
1.1 标本来源 2005-2011年，玉溪市6县1区(红塔区)流行病学独立确诊的甲型副伤寒病例(Paratyphoid A，PA)，从患者血液中获得的252株甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A， SPA)，其中，2005年4株，2006年43株，2007年85株，2008年34株，2009年28株，2010年30株，2011年28株，所有菌株经过纯培养或活化后，用沙门菌O2、Ha抗血清(卫生部兰州生物制品研究所)鉴定到血清型层次。
1.2 方法
1.2.1 抗微生物药物敏感性试验
在米勒－海顿琼脂(Miller-Haydn agar，MH)(英国Oxoid)平板上，采用纸片K-B扩散技术进行抗生素敏感性试验，为确保测试菌抗微生物抗性实验的稳定性，1株已知最小抑菌浓度的大肠埃希菌(Escherichia coli ATCC 25922)作为质控对照，与测试菌在相同条件下进行检测。测试菌接种于普通营养琼脂平扳37 ℃孵育16～18 h，取纯培养菌落在1~3 ml生理盐水中制成0.5麦氏浊度(1×108～2×108 cfu/ml)的菌液并均匀涂布在直径9 mm，厚4 mm的MH平板上，每个平板帖6片药敏纸片，于35 ℃孵育18 h观察结果，结果按照美国临床实验室标准化研究所(clinical and laboratory standards institute， CLSI)推荐的药敏试验指南(2009年版)进行判读。药敏纸片购自卫生部兰州生物制品研究所，共17种：氨苄西林(10 μg)、阿莫西林(25 μg)、 头孢噻吩 (30 μg)、头孢噻肟(30 μg)、亚胺培南(10 μg)、奈替米星(30 μg)、四环素(30 μg)、复方新诺明(23.75/1.25 μg)、氯霉素(30 μg)、氨曲南(30 μg)、呋喃妥因(300 μg)、左氧氟沙星(5 μg)、诺氟沙星(10 μg)、环丙沙星(5 μg)、洛美沙星(10 μg)、萘啶酸(30 μg)、利福平(5 μg)，试剂均在有效期内使用。
1.2.2 最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration，MIC)的测试[5]
选择萘定酸、环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星抗生素的Etest测试条(AB Biodisk， Solna，瑞典)，对分离株进行MIC的测试。测试菌接种于普通营养琼脂平扳37 ℃孵育16~18 h，取纯培养菌落在1~3 ml生理盐水中制成0.5麦氏浊度(1×108～2×108 cfu/ml)的菌液并均匀涂布在直径9 mm，厚4 mm的MH平板上，把Etest测试条帖于MH平板上，每个平板帖1条，于35 ℃孵育18 h观察结果，在抑菌环与Etest测试条的横切交界处的刻度读出MIC，试剂均在有效期内使用。
2 结果
2.1 SPA分离株对抗生素的敏感性监测结果 252株甲型副伤寒沙门菌分离株对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻吩、亚胺培南、奈替米星、复方新诺明、氯霉素7种抗生素均敏感；头孢噻肟的敏感率是99.21％；四环素、氨曲南、左氧氟沙星的敏感率是98.41％；呋喃妥因的敏感率是97.62％；诺氟沙星的敏感率是95.63％；环丙沙星的敏感率是36.51%，中介63.49%；洛美沙星的敏感率是0.79%，中介43.65%，耐药55.56%；萘定酸的敏感率是0.79%、耐药是99.21%；分离株对利福平耐药，见表1。2005-2011年期间甲型副伤寒分离株对洛美沙星的耐药率分别是25.00%、51.16%、54.12%、55.88%、57.14%、60.00%和60.71%，中介率分别是50.00％、48.82％、44.71％、44.12％、42.86％、40.00％和39.29％，敏感率2005年为25.00％，2007年为1.18％，其余年份为0.00％；对环丙沙星的敏感率分别是75.00%、41.86%、38.84%、35.29%、32.14%、30.00%和28.57％，中介率分别是25.00％、58.14％、61.18%、64.71％、67.86％、70.00％和71.43％，各年份耐药率均为0.00％，见表2。
2.2 SPA分离株的MIC
250株分离株属于萘啶酸抗性(nalidixic acid-resistant，NAR)株，其余2株属于萘啶酸敏感(nalidixic acid-sensitive，NAS)株， 用Etest测试条对分离株进行萘啶酸、环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星的MIC测定，NAR株相应抗生素MIC值范围依次为>256、0.50~0.75、0.50~1.00、2.00~4.00 μg/ml； NAS株相应抗生素的MIC值范围依次为≤16、 0.023~0.030、0.032~0.094、0.025~0.125 μg/ml，见表3。NAR分离株MIC值远高于NAS株的MIC(总体比较χ2=244.063， P<0.001)。
表1 SPA分离株对17种抗生素的敏感性监测结果
Table 1 Susceptibility of SPA isolates to 17 antibiotics
| 抗生素 | 试验菌株 | 敏感 | 中介 | 耐药 | |||||
| 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | ||||
| 氨苄西林 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 阿莫西林 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 头孢噻吩 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 头孢噻肟 | 252 | 250 | 99.21 | 2 | 0.79 | 0 | 0.00 | ||
| 亚胺培南 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 奈替米星 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 四环素 | 252 | 248 | 98.41 | 4 | 1.59 | 0 | 0.00 | ||
| 复方新诺明 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 氯霉素 | 252 | 252 | 100.00 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | ||
| 氨曲南 | 252 | 248 | 98.41 | 0 | 0.00 | 4 | 1.59 | ||
| 呋喃妥因 | 252 | 246 | 97.62 | 0 | 0.00 | 6 | 2.38 | ||
| 左氧氟沙星 | 252 | 248 | 98.41 | 0 | 0.00 | 4 | 1.34 | ||
| 诺氟沙星 | 252 | 241 | 95.63 | 11 | 4.37 | 0 | 0.00 | ||
| 环丙沙星 | 252 | 92 | 36.51 | 160 | 63.49 | 0 | 0.00 | ||
| 洛美沙星 | 252 | 2 | 0.79 | 110 | 43.65 | 140 | 55.56 | ||
| 萘啶酸 | 252 | 2 | 0.79 | 0 | 0.00 | 250 | 99.21 | ||
| 利福平 | 252 | 0 | 0.00 | 0 | 0.00 | 252 | 100.00 | ||
表2 SPA分离株对喹诺酮类药物抗性的变迁
Table 2 Change of resistance of SPA isolates to quinolones
| 年份 | 试验菌株 | 洛美沙星 | 环丙沙星 | |||||||||||||||
| 敏感 | 中介 | 耐药 | 敏感 | 中介 | 耐药 | |||||||||||||
| 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | 株数 | 构成比(%) | |||||||
| 2005 | 4 | 1 | 25.00 | 2 | 50.OO | 1 | 25.00 | 3 | 75.00 | 1 | 25.00 | 0 | 0.00 | |||||
| 2006 | 43 | 0 | 0.00 | 21 | 48.84 | 22 | 51.16 | 18 | 41.86 | 25 | 58.14 | 0 | 0.00 | |||||
| 2007 | 85 | 1 | 1.18 | 38 | 44.71 | 46 | 54.12 | 33 | 38.84 | 52 | 61.18 | 0 | 0.00 | |||||
| 2008 | 34 | 0 | 0.00 | 15 | 44.12 | 19 | 55.88 | 12 | 35.29 | 22 | 64.71 | 0 | 0.00 | |||||
| 2009 | 28 | 0 | 0.00 | 12 | 42.86 | 16 | 57.14 | 9 | 32.14 | 19 | 67.86 | 0 | 0.00 | |||||
| 2010 | 30 | 0 | 0.00 | 12 | 40.00 | 18 | 60.00 | 9 | 30.00 | 21 | 70.00 | 0 | 0.00 | |||||
| 2011 | 28 | 0 | 0.00 | 11 | 39.29 | 17 | 60.71 | 8 | 28.57 | 20 | 71.43 | 0 | 0.00 | |||||
表3 萘啶酸抗性和萘啶酸敏感SPA分离株的MIC
Table 3 MIC of nalidixic acid resistant and nalidixic acid sensitive SPA isolates (μg/ml)
| 抗生素 | 抗性株(MICs > 256 μg/ml) | 敏感株(MIC≤16 μg/ml) | |||||||||||
| MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | MIC(μg/ml) | 试验菌株数 | ||
| 环丙沙星 | 0.50 | 115 | 0.75 | 135 | - | - | - | - | 0.023 | 1 | 0.030 | 1 | |
| 左氧氟沙星 | 0.50 | 32 | 0.75 | 133 | 1.00 | 77 | 2.00 | 8 | 0.032 | 1 | 0.094 | 1 | |
| 诺氟沙星 | 2.00 | 13 | 3.00 | 155 | 4.00 | 82 | - | - | 0.025 | 1 | 0.125 | 1 | |
3 讨论
分离株对萘啶酸、利福平高度耐药，洛美沙星中度耐药，其他被测试抗生素的敏感率在36.51%～100％ 之间；对洛美沙星的中介率逐年下降，耐药率逐年上升；对环丙沙星的中介率不断上升，敏感性不断降低；NAR株降低了对氟喹诺酮类药物的敏感性。NAR分离株引起的肠热症具有对氟喹诺酮的低敏感性，并与疫病区的高发病率和病死率有关，尤其与退热时间延长和重复治疗率有关联[6]。尽管环丙沙星抗性(MIC ≥ 4 μg/ml)少见，但经常有降低氟喹诺酮敏感性(环丙沙星MIC范围：0.25 ～1.0 μg/ml) 的报道[7]，与笔者的研究结果相似。氟喹诺酮类药物(环丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等)由于广谱、高效、相对价廉、使用方便等特点，是FLDS引起伤寒和副伤寒的最有效的治疗药物，临床治愈率>96%， 平均热退时间<4 d，复发率和粪便带菌率<2％ ，但监测结果显示氟喹诺酮类药在玉溪市境内已形成中高度耐药，如果继续大量使用该类药物会造成临床治疗失败，带菌率高，复发率高，应慎用。有文献指出[9]，细菌对氟喹诺酮类耐药性的迅速上升与大量无指征地滥用该类药物相关，耐药率与用药频度呈正相关。三代头孢菌素具有抗菌活性强，对沙门菌的MIC均≤0.25 μg/ml，体外的抑菌活性比氯霉素大400倍。对β-内酰胺酶相对稳定，因而有很强的抗菌力，对肾基本无毒性，无四氮唑侧链，使用后不会发生出血并发症，鉴于上述优点，世界各地普遍用于治疗伤寒及甲型副伤寒沙门菌的感染。鉴于第三代头孢菌素使用的优点及我们实验结果，该药可作为当地治疗甲型副伤寒的首选药，其他抗生素视情况酌情选用，尽管玉溪境内氨苄西林、阿莫西林对甲型副伤寒菌敏感，但多年来的广泛使用，且用药频度高，应适当控制，减少对该类抗生素的滥用，当然在可能的情况下，应结合患者分离株药敏结果，针对性用药。
1999年在玉溪市红塔区首次报告PA病例和NAR分离株，当时NAR表型的流行率是12.50%，2000年突然上升到82.19％，1999-2008年以来的连续监测结果已证实NAR表型的流行率一直在稳步上升，最高达到100％[10]。在2001年红塔区出现NAR株占优势后，已从玉溪各县分离到NAR株，表明NAR株已传播到玉溪其他区域并逐渐代替NAS株[11]，可能是因为NAR株存活优势或氟喹诺酮类药物广泛使用，使得NAS株被淘汰，NAR株存活并流传下来，这是氟喹诺酮类药物耐药变迁的主要因素，意味着玉溪地方性、流行性NAR株主要是单一NAR克隆由原始疫区扩散到其他区域[10]。
监测结果显示，玉溪市甲型副伤寒沙门菌耐药变迁趋势是对氟喹诺酮类抗生素的耐药上升迅速，合理应用该类药物，对遏制耐药性的进一步发展，具有十分重要的意义。建议采取适宜措施以预防氟喹诺酮抗性水平的增加。
参考文献
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