非伤寒沙门菌指伤寒、副伤寒以外的各种沙门菌的总称，包含2500多种血清型。非伤寒沙门菌在外环境及动物中广泛存在，其宿主范围较广，既可感染动物也可感染人类。非伤寒沙门菌主要通过污染的食物与水经口感染人类，是导致人类胃肠炎及食物中毒的主要病原。据统计，全世界每年有13亿人罹患非伤寒沙门菌感染，其中有300万人死于该类感染^[1]。在美国，该菌是引起腹泻并导致死亡的各类病原微生物(病毒、寄生虫以及细菌)中最常见的一类，占细菌性腹泻病原的第1或第2位，为此美国每年所花费的医疗费用以及相关财产损失高达5～23亿美元。在发展中国家，尤其是非洲地区由于医疗卫生水平低以及民众对公共卫生知识的了解甚少，非伤寒沙门菌感染病例十分常见，且病死率高达18%～24%^[2]。而免疫缺陷患者如艾滋病患者感染非伤寒沙门菌后往往造成菌血症，即使接受抗生素治疗，依然有超过20%的患者死亡。
随着抗菌药物在动物体内的广泛、不适当的应用，非伤寒沙门菌细菌耐药性渐趋严重，人体摄入污染病原菌或耐药菌的食物致腹泻后，经过人体的增殖及药物的选择，进一步加剧耐药病原菌的筛选、扩散。而人体不适当抗生素的应用，往往导致病程的延长、病情的加重，对患者生命造成威胁，因此对该类菌的耐药检测十分重要。
在我国，近几年的实验室沙门菌监测发现，鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、德尔卑沙门菌、山夫登堡沙门菌、阿贡纳沙门菌、韦太夫雷登沙门菌是我国临床最常见的6种沙门菌致病血清型。对鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、德尔卑沙门菌的耐药情况报道较多，但对阿贡纳、韦太夫雷登和山夫登堡沙门菌的药敏情况研究较少，故本研究选取我国2006—2010年期间来自全球食源性疾病监测网的8个省份的腹泻患者中分离的该3种血清型沙门菌，检测其对常用抗生素的敏感性，旨在建立我国沙门菌的耐药基线数据库，为卫生行政部门制定和评价我国沙门菌耐药性干预措施提供依据，为临床医生合理选择抗生素治疗沙门菌感染提供参考。 1.1 菌株来源
　　实验菌株为中国疾病预防控制中心传染病预防控制所保存的来自我国8个省(自治区)于2006—2010年间自腹泻患者分离的219株沙门菌，包括阿贡纳沙门菌57株、韦太夫雷登沙门菌79株、山夫登堡沙门菌83株。所有菌株经生化反应及血清凝集试验鉴定。沙门菌抗血清购自丹麦食品安全研究所，质控菌株大肠埃希菌ATCC25922购自美国典型培养物保藏中心(ATCC)。
1.2 菌株药物敏感性测试及判定
　　 本研究采用MH肉汤微量稀释法测试菌株对14种抗生素的敏感性， 14种抗生素包括氨苄西林(AMP)，奥格门丁(阿莫西林克林维酸钾，AUG)，头孢噻肟(CTX)，头孢他啶(CTZ)，头孢吡肟(FEP)，萘啶酸(NAL)，环丙沙星(CIP)，庆大霉素(GEN)，链霉素(STR)，磺 胺甲恶唑(SMX)，甲氧苄氨嘧啶(TMP)，复方新诺明(SXT)，氯霉素(CHL)和四环素(TET)。抗生素微量稀释板为天津金章生物技术有限公司生产，各抗生素受试浓度如下：AMP与NAL的抗生素浓度均为 0.125～128 μg/ml, AUG为 0.125/0.06～128/64 μg/ml, CTX、 CTZ、FEP、STR、CHL均为0.06～128 μg/ml, GEN为0.06～64 μg/ml，CIP为0.008～16 μg/ml，SMX为0.5～1024 μg/ml，TMP为0.015～32 μg/ml，SXT为0.015/0.3～32/64 μg/ml, TET为0.03～64 μg/ml。试验操作严格按CLSI标准执行，操作步骤简述如下：用无菌脱脂棉签挑取3～5个菌落，均匀研磨至适量的无菌生理盐水中，使其浊度达到0.5麦氏，此浊度对应的细菌浓度为1×10⁸～3×10⁸ cfu/ml。将菌液适量稀释后接种于含抗生素的96孔板中，最后保证各孔中的细菌浓度约为1×10⁵ cfu/ml。将96孔板置37 ℃温箱中孵育16～20 h后，观察细菌生长情况。无细菌生长的最低抗生素浓度即为最小抑菌浓度(MIC)值。同时设立空白对照孔排除细菌污染及不含抗生素的细菌生长对照孔及ATCC 25922的质控对照，只有ATCC 25922的MIC值在质控范围内才确认本次实验有效。抗生素阈值的判定标准采用CLSI2012版新标准。
1.3  产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检测
　　采用WHO推荐的纸片法检测耐三代头孢类抗生素的菌株是否产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)。根据ESBLs具有被克拉维酸抑制的特点，在三代头孢类抗生素和克拉维酸的混合纸片周围，产ESBLs的菌株可以出现抑菌圈扩大，因此通过比较单独的头孢类抗生素纸片和加入克拉维酸的头孢类抗生素纸片的抑菌环的大小， 即可判断菌株是否产ESBLs。本实验所有 操作过程均严格按照CLSI2012版标准执行。6种抗生素纸片浓度为头孢他啶(CAZ 30 μg)、头孢噻 肟(CTX 30 μg)、 头孢他啶/克拉维酸(30 μg/ml/4 μg/ml)、头孢噻肟/克拉维酸(30 μg/10 μg)。 2.1 全部受试菌株对14种抗生素敏感性
　　219株沙门菌对14种抗生素的敏感及耐药情况见表1，其中对第四代头孢类抗生素头孢吡肟均敏感，敏感率为100%，对第三代头孢菌素(头孢噻肟、头孢他啶)及氯霉素、庆大霉素、环丙沙星的敏感率为99%左右，对氨苄西林、奥格门丁、甲氧苄氨嘧啶、复方新诺明、四环素的敏感率为97%左右，对萘啶酸的敏感率为91.32%，对链霉素的敏感率为93.61%，对磺胺甲恶唑的敏感性最低，为85.39%。受试的14种抗生素，菌株的MIC₅₀均在敏感阈值范围内，MIC₉₀除萘啶酸、磺胺甲恶唑超过耐药阈值外，余均在敏感范围内，上述结果说明这3种血清型沙门菌对目前临床常用抗生素敏感性较高，若临床发生此3种血清型沙门菌急性感染时，可以使用除磺胺甲恶唑外的药物进行前期经验性治疗。

表1 219株沙门菌临床分离株对抗生素的敏感性
Table 1 Drug susceptibility of 219 clinical Salmonella strains to antibiotics

抗生素	三种血清型沙门菌
	菌株数	敏感率(%)		菌株数	中介率(%)		菌株数	耐药率(%)
氨苄西林	213	97.26		1	0.46		5	2.28
奥格门丁	214	97.72		1	0.46		4	1.83
头孢噻肟	218	99.54		-	-		1	0.46
头孢他啶	216	98.63		-	-		3	1.37
头孢比肟	219	100.00		0	0.00		0	0.00
氯霉素	216	98.63		1	0.46		2	0.91
环丙沙星	218	99.54		0	0.00		1	0.46
庆大霉素	217	99.09		0	0.00		2	0.91
萘啶酸	200	91.32		-	-		19	8.68
链霉素	205	93.61		11	5.02		3	1.37
磺胺甲恶唑	187	85.39		-	-		32	14.61
甲氧苄胺嘧啶	213	97.26		-	-		6	2.74
复方新诺明	215	98.17		-	-		4	1.83
四环素	211	96.35		0	0.00		8	3.65

  注：“-”表示无数据。

2.2  三种沙门菌血清型对14种抗生素的敏感性
　　 其中阿贡纳沙门菌对除头孢吡肟外的各类药物均出现了不同程度的耐药，见表2， 对磺胺甲恶唑的耐药率最高，达35.09%，菌株MIC₅₀(256 μg/ml)虽在敏感范围内,但MIC₉₀超过1024 μg/ml；其次为萘啶酸及四环素，耐药率均为12.28%，其中1株耐环丙沙星(MIC值达4 μg/ml)，菌株对该2种抗生素的MIC₉₀分别为16 μg/ml及64 μg/ml，说明菌株对四环素耐药程度高于萘啶酸；多重耐药(对3种及3种以上抗生素耐药)菌株6株，见表3。 而79株韦太夫雷登沙门菌对大多数抗生素敏感(表2)，仅对萘啶酸、甲氧苄胺嘧啶、四环素3种药物具有耐药性，耐药率均低于3%，多重耐药菌株1株(表3)，菌株MIC₅₀及MIC₉₀均明显低于敏感阈值。 与阿贡纳沙门菌类似，仅有1株山夫登堡沙门菌为多重耐药株(表3)，但该血清型菌株对磺胺甲恶唑、萘啶酸的耐药率较高，为14%左右(表2)，MIC₉₀分别达512 μg/ml及128 μg/ml以上；只有1株对链霉素耐药，但中介率为6.02%，与韦太夫雷登沙门菌类似(其中介率为5.06%，表2)；对其他抗生素而言，83株山夫登堡沙门菌均敏感。
2.3 三种沙门菌血清型对14种抗生素的耐药谱
　　 219株沙门菌对14种抗生素共产生13种耐药谱(表3)。219株沙门菌中对一种抗生素耐药的菌株33株，主要包括磺胺甲恶唑耐药株23株，其中阿贡纳沙门菌14株，山夫登堡沙门菌9株；萘啶酸耐药株9株，包括阿贡纳沙门菌2株和山夫登堡沙门菌7株。对两种抗生素耐药菌株5株，分别包括耐四环素-萘啶酸(TET-NAL)的阿贡纳沙门菌3株和耐磺胺甲恶唑-萘啶酸(SMX-NAL)的山夫登堡沙门菌2株。对3种及以上抗生素耐药的菌株8株，分别属于8种不同的耐药谱(表3)，包括STR-SMX-NAL多耐韦太夫雷登沙门菌1株，TET-TMP-NAL多耐山夫登堡沙门菌1株及分别属于6种不同耐药谱(SMX-TMP-SXT，AMP-AUG-SMX-TET，AMP-AUG-CTX-CTZ-CRO，AMP-AUG-CHL-STR-SMX-TET-TMP-SXT-NAL，AMP-AUG-STR-SMX-TET-TMP-SXT-GEN-NAL，AMP-CHL-STR-SMX-TET-TMP-SXT-GEN-NAL-CIP)的阿贡纳沙门菌各1株，其中2株ACSSuT耐药阿贡纳沙门菌，分离自2009年，同时对萘啶酸高度耐药(MIC值大于128 μg/ml)，即ACSSuT-NAL，且其中1株同时耐环丙沙星。此外，产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株1株，为阿贡纳沙门菌。结果说明3种沙门菌血清型对14种抗生素的耐药谱差异较大且存在不同程度的多重耐药现象，尤其是阿贡纳沙门菌多重耐药现象相对较严重。

表2 不同血清型沙门菌分离株对14种抗生素的敏感性
Table 2 Serotype specific drug susceptibility of clinical Salmonella strains to 14 antibiotics

抗生素	阿贡纳沙门菌(n=57)				韦太夫雷登沙门菌(n=79)				山夫登堡沙门菌(n=83)
	敏感率(%)	中介率(%)	耐药率(%)		敏感率(%)	中介率(%)	耐药率(%)		敏感率(%)	中介率(%)	耐药率(%)
氨苄西林	89.47	1.75	8.77		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
奥格门丁	91.23	1.75	7.02		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
头孢噻肟	98.25	-	1.75		100.00	-	0.00		100.00	-	0.00
头孢他啶	94.74	-	5.26		100.00	-	0.00		100.00	-	0.00
头孢比肟	100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
氯霉素	94.74	1.75	3.51		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
环丙沙星	98.25	0.00	1.75		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
庆大霉素	96.49	0.00	3.51		100.00	0.00	0.00		100.00	0.00	0.00
萘啶酸	87.72	-	12.28		98.73	-	1.27		86.75	-	13.25
链霉素	92.98	3.51	3.51		94.94	5.06	0.00		92.77	6.02	1.21
磺胺甲恶唑	64.91	-	35.09		100.00	-	0.00		85.54	-	14.46
甲氧苄胺嘧啶	92.98	-	7.02		97.47	-	2.53		100.00	-	0.00
复方新诺明	92.98	-	7.02		100.00	-	0.00		100.00	-	0.00
四环素	87.72	0.00	12.28		98.73	0.00	1.27		100.00	0.00	0.00

表3 219株沙门菌耐药谱
Table 3 Drug resistant spectrum of 219 clinical Salmonella strains

耐药谱	菌株数
NAL	9
SMX	23
TMP	1
TET-NAL	3
SMX-NAL	2
SMX-TMP-SXT	1
TET-TMP-NAL	1
STR-SMX-NAL	1
AMP-AUG-SMX-TET	1
AMP-AUG-CTX-CTZ-CRO	1
AMP-AUG-STR-SMX-TET-TMP-SXT-GEN-NAL	1
AMP-AUG-CHL-STR-SMX-TET-TMP-SXT-NAL	1
AMP-CHL-STR-SMX-TET-TMP-SXT-GEN-NAL-CIP	1

  注：NAL：萘啶酸，SMX：磺胺甲恶唑，TMP：甲氧苄胺嘧啶；TET：四环素；STR：链霉素；AMP：氨苄西林；AUG：奥格门丁(阿莫西林/克林维酸钾)；CHL：氯霉素；SXT：复方新诺明(TMP/SMX)；GEN：庆大霉素。

　　除鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌外，山夫登堡沙门菌、阿贡纳沙门菌及韦太夫雷登沙门菌是我国临床常见的3种沙门菌致病血清型，也是食品中污染的前5位主要沙门菌血清型，因此，加强其引起疾病的暴发监测及病原耐药监测显得尤为重要。阿贡纳沙门菌在我国曾多次引起群体性食物中毒，并有阿贡纳沙门菌污染奶粉引起新生儿感染及经乳汁导致脑膜炎的报道 。本研究发现57株阿贡纳沙门菌临床分离株中35株对所测试的14种抗生素均敏感，但对磺胺甲恶唑、四环素、萘啶酸的耐药率较高，与食品来源阿贡纳沙门菌耐药谱相似^[5]。发现2株同时耐萘啶酸的ACSSuT耐药表型菌株，但这两株菌分离自不同时间及不同地点，且脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型不同(数据未给出)，因此可排除同一暴发来源的可能性。另发现1株产ESBLs菌株，但对第四代头孢菌素敏感，其编码基因有待于进一步扩增测序阐明。
山夫登堡沙门菌可在环境中持续存在成为潜在的污染源，并造成腹泻病例的持续发生。本研究发现83株山夫登堡沙门菌除对磺胺甲恶唑、萘啶酸的耐药率达14%外，对其他抗生素均敏感，未发现对四环素的耐药性，与国内其他报道的对四环素耐药率为75.6%(31/41)和对萘啶酸耐药率为2.4%(1/41)的结果不一致^[6]，原因可能是菌株来源不同、药敏判定标准不同所致。加之四环素药物敏感性测定时对培养基等试剂质量要求相对较高，因此出现四环素敏感性/耐药率的差异。本研究所有菌株在进行药物敏感性测试时，均使用ATCC25922做参照，确保其MIC在可控范围内，以保证结果的可信性。国外曾报道发现患者来源山夫登堡沙门菌对多种抗生素如氨苄西林、氯霉素、头孢噻肟、头孢曲松、庆大霉素、环丙沙星耐药^[7]，但在本研究检测的菌株中尚未发现此耐药现象。鉴于国内曾发现对庆大霉素、氯霉素、红霉素、四环素、氨苄西林均不敏感，耐药率达100%的引起婴幼儿腹泻的山夫登堡沙门菌，因此应加强该菌耐药性检测及监测。
韦太夫雷登沙门菌虽然在我国已引起多起暴发，但其耐药率相对较低，对14种抗生素敏感性达97%以上。但由于该菌存在于常见的食物如鸡肉、鸡脚、鸭脚、鹌鹑蛋中，其引起暴发的风险相对较高，加之抗生素的滥用，更容易引起耐药菌株或耐药克隆的扩散，故该菌的耐药监测不容忽视。
219株沙门菌中仅发现8株对3种及3种以上抗生素耐药的菌株，其中阿贡纳沙门菌6株，而且对其他2种血清型均敏感的青霉素、头孢类抗生素及氨基糖苷类、四环素类、氯霉素类抗生素存在不同程度的耐药，说明阿贡纳沙门菌耐药程度及范围较其他2种血清型严重，但轻于耐药现象普遍的鼠伤寒沙门菌，后者多重耐药率可达30%(本实验室待发表数据)。另外，ACSSuT耐药现象在鼠伤寒沙门菌中较常见 ，在阿贡纳沙门菌中报道较少，本研究发现2株无流行病学联系的ACSSuT耐药的阿贡纳沙门菌，PCR检测编码ACSSuT的沙门菌毒力岛1的保守基因均阳性，提示该岛的存在及基因水平转移，具体基因组成及结构尚在研究中。
虽然按照CLSI药物敏感判定标准，219株沙门菌中仅有1株阿贡纳沙门菌对环丙沙星耐药，但按照EUCAST流行病学阈值标准(S: MIC<0.125 μg/ml, R: MIC≥0.125 μg/ml)， 21株沙门菌对环丙沙星耐药，其中阿贡纳沙门菌10株，山夫登堡沙门菌10株，韦太夫雷登沙门菌1株，菌株MIC值主要集中分布于0.25~0.5 μg/ml，说明这些菌株对氟喹诺酮类药物敏感性明显降低。
总之，三种沙门菌血清型——阿贡纳、韦太夫雷登和山夫登堡沙门菌对14种常见抗生素的敏感性不同，不同血清型沙门菌存在不同程度的耐药及多重耐药，在细菌性传染病防控中应加强对沙门菌病的耐药监测及综合监测，指导沙门菌病的防治，提高应对疫情的能力。

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