疾病监测, 2013, 28(11): 881-883
DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.11.004
Surveillance of avian influenza in alive poultry markets in urban and rural areas in Shiyan, Hubei, 2011-2012
MEI Yu-fa, WANG Xi-yun, CUI Long, SONG Xiao-jia, ZHENG Xiang-mei, ZHAO Guo-bing
Shiyan Center for Disease Control and Prevention, Shiyan 442000, Hubei, China
Abstract
Objective To understand the circulation of avian influenza virus (AIV) in Shiyan, Hubei province, and provide evidence for the prevention and control of human infection with AIV. Methods Two surveillance sites were set up in urban area of Shiyan and in Yunxian county, and 210 out-environment samples (washing water, filthy water, feces, cover of cage, etc.) were collected from these surveillance sites from 2011 to 2012 to detect nucleic acid of AIV, the positive samples were further detected for H5, H7, H9 and N1 nucleic acid with real-time PCR. Results The viral nucleic acid detection rates of AIV, H5, H7, H9 and N1 were 47.62%, 19.52%, 0, 34.76% and 17.62% respectively. The AIV detection rate was highest in washing water and lowest in feces. Most positive samples were from chickens, only small number of them were from pigeons and ducks. The detection rates of AIV, subtype H5 and H9 were low in spring and autumn but high in summer and winter. The detection rate of subtype H5 was lower than subtype H9. The detection rates of AIV, subtype H5, H9 and N1 were higher in the urban area of Shiyan than in Yunxian. Conclusion AIV, including subtype H5 and H9, circulated in poultry in alive poultry markets in Shiyan, so it is necessary to take active prevention and control measures to prevent and control human infection with AIV.
Keywords:    alive poultry market in urban and rural areas   out-environment   avian influenza virus   circulation  

2011-2012年湖北省十堰市城乡活禽市场禽流感监测分析
梅玉发, 王喜云, 崔龙, 宋晓佳, 郑向梅, 赵国兵
湖北省十堰市疾病预防控制中心, 湖北 十堰 442000
摘要
目的 监测湖北省十堰市城乡活禽市场中禽流行性感冒（禽流感）病毒的分布状况，为人禽流感防控提供参考依据。方法 2011-2012年，设置十堰市区和郧县两个监测点，每季度从各监测点采集10~15份外环境标本（冲洗水、污水、禽类粪便及笼具表面等），累计采集210份，以实时荧光定量RT-PCR方法检测禽流感病毒核酸FluA，阳性者检测H5、H7、H9亚型核酸和N1核酸。结果 FluA、H5、H7、H9和N1的检出率依次为47.62%、19.52%、0、34.76%和17.62%。FluA检出率最高的环境标本为冲洗禽类的污水（65.22%），最低的为禽类粪便（36.62%），阳性标本多数明确来自鸡源，少数来自鸽和鸭。FluA、H5与H9的检出率均在一、三季度较低，二、四季度较高，H5检出率总体上低于H9。市区禽流感病毒核酸FluA、H5、H9和N1检出率均明显高于郧县。结论 十堰市城乡活禽市场的禽类与外环境中常年流行着H5和H9等多种亚型禽流感病毒，应积极采取综合性防控措施。
关键词:    城乡活禽市场   外环境   禽流感病毒   分布  

内容大纲
1 材料与方法
1.1 标本收集
1.2 标本检测
1.3 数据分析
2 结果
2.1 时间分布
2.2 标本分布
2.2.1 不同类型标本分布
2.2.2 不同禽源标本分布
2.3 地区分布
3 讨论
　　人禽流感是由人类感染禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)所引起的人禽共患传染病，其传播途径以禽-人、环境-人和母-婴间垂直传播为主 [1]。研究表明，H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7和H9N2亚型禽流感病毒能直接感染人[2],尤其是高致病性H5N1禽流感病毒仍然在很多国家和地区导致人感染病例不断发生[3]。2013年上半年我国又发现H7N9亚型毒株直接感染人，已致病132例，致死39例。为评估湖北省十堰市人禽流感发生风险，以便采取有针对性的防控措施，现对2011-2012年该市城乡活禽市场环境中禽流感病毒H5、H7、H9亚型的分布状况分析报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本收集
　　在十堰市区选择有代表性的3家城乡活禽市场作为市区监测点，在郧县选择有代表性的3家城乡活禽市场家禽屠宰场所作为乡村监测点，在各监测点内采集清洗禽类的污水、地面污水、禽类粪便、笼具表面、宰杀或摆放禽肉案板的表面以及禽类饮用水等外环境标本。2011-2012年，每季度从各监测点采集10~15份标本(郧县监测点2012年改为每月采集5份标本)。标本采集于装有约3 ml Hank's保存液的螺口管中，经一式三份分装后送至十堰市疾病预防控制中心(CDC)国家流感/禽流感监测网络实验室，于-80 ℃冰柜冻存备检。累计收集标本210份。
1.2 标本检测
　　从环境标本中提取病毒RNA后，以实时荧光定量反转录-聚合酶链反应 法(real time RT-PCR)及时进行禽流感病毒FluA核酸检测，FluA阳性的标本进一步检测H5、H9亚型核酸和N1核酸。2013年5月，对所有FluA阳性的标本重新提取RNA，补充检测H7亚型核酸。禽流感病毒RNA提取试剂盒、禽流感病毒RNA检测试剂盒(PCR荧光法)均由QIAGEN公司提供，PCR扩增引物探针由国家流感中心提供。
1.3 数据分析
　　将有关数据录入Excel 2003软件进行整理，通过SPSS 13.0软件进行统计分析。
2 结果
2.1 时间分布
　　十堰市城乡活禽市场外环境中FluA、H5、H9在不同季节的检出率依次在30.00%～59.09%、3.33%～35.29%和8.33%～47.06%之间波动，未检出H7亚型禽流感病毒。FluA、H5与H9的检出率均在一、三季度较低，二、四季度较高，H5检出率总体上低于H9，见图1。

图1 2011-2012年不同季节禽流感检测结果
Figure 1 Surveillance result of avian influenza, 2011-2012
2011-2012年不同季节禽流感检测结果

2.2 标本分布
2.2.1  不同类型标本分布
　　从不同类型的标本中均检出禽流感病毒FluA核酸，最高的为冲洗禽类的污水(65.22%)，最低的为禽类粪便(36.62%)，平均检出率达47.62%。H5检出率最高的为死禽或禽内脏(33.33%)，最低的为禽类粪便(14.08%)，平均检出率为19.52%； H9检出率最高的为死禽或禽内脏(55.56%)，最低的为禽类粪便(22.54%)，平均检出率为34.76%；N1检出率最高的为死禽或禽内脏(33.33%)，最低的为禽类粪便(11.27%)，平均检出率为17.62%；13.33%的标本同时检出H5和H9。未检出H7亚型禽流感病毒，见表1。

表1 2011-2012年不同种类标本禽流感病毒核酸检测结果
Table 1 Detection result of AIV nucleic acid in different samples, 2011-2012
核酸类别 禽类粪便(n=71) 笼具(n=54) 冲洗禽类污水(n=46) 地面污水(n=23) 死禽或禽内脏(n=9) 其他(2)(n=7)
阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/%
FluA2636.622240.743065.221356.52555.56457.14
H51014.08916.671123.91730.43333.33114.29
H91622.542037.042350.00730.43555.56228.57
N1811.27916.67919.56730.43333.33114.29
H5+H9(1)79.86712.96510.87521.74333.33114.29
  注:(1)表示同1份标本中同时检出H5和H9两种亚型的禽流感病毒核酸，下同；(2)指宰杀或摆放禽肉案板的表面和禽饮用水。

2.2.2 不同禽源标本分布
　　采集的标本多数明确来自鸡源，少数来自鸽和鸭。有1份鸽粪标本检出H5，1份死鸽和1份鸭笼标本同时检出H5与H9。
2.3 地区分布
　　累计从十堰市区的3家城乡活禽市场采集95份外环境标本，从郧县的3家城乡活禽市场家禽屠宰点采集115份标本。市区禽流感病毒FluA、H5、H9、N1核酸检出率均明显高于郧县(P<0.01), H5和H9两种亚型的禽流感病毒混合污染的情况也较郧县更为突出(P<0.01)，见表2。
3 讨论
　　十堰市2011-2012年外环境禽流感监测结果显示，该市城乡活禽市场中, 禽流感病毒平均检出率为47.62%，高于武汉市的34.00%[4]、广西区的12.40%[5]和楚雄州的4.64%[6]。H5与H9禽流感病毒在不同季节的 检出率分别在 3.33%～35.29% 和8.33%～47.06%之间波动，表明该市城乡活禽市场中常年流行着H5、H9等多种亚型禽流感病毒。

表2 2011-2012年不同监测点禽流感病毒检测结果
Table 2 Detection result of AIV at different surveillance sites, 2011-2012
核酸类别 十堰市区(n=95) 十堰郧县(n=115) χ2值 P值
阳性数/份 阳性率/% 阳性数/份 阳性率/%
FluA5962.114135.6514.5950.000
H52930.531210.4313.3660.000
H94446.322925.2210.2120.001
N12627.37108.7012.7700.000
H5+H9(1)2324.2154.3517.7620.000
  注:(1)表示同一份标本中同时检出H5和H9两种亚型的禽流感病毒核酸。

FluA、H5和H9的检出率均在二、四季度比一、三季度高，表明二、四季度是该市城乡活禽市场环境中禽流感病毒污染较严重的季节。2年中始终未检出H7亚型禽流感病毒，与该市没有发现人感染H7N9禽流感病例相吻合。
该调查还显示，该市活禽市场环境标本禽流感病毒检出率由高到低依次为：冲洗禽类的污水、地面污水、宰杀或摆放禽肉案板的表面和禽饮用水、死禽或禽内脏、笼具、粪便。提示在禽类销售、宰杀等环节中极易造成活禽市场的环境污染，尤其是宰杀环节中所用的水和案板等更容易被禽流感病毒污染。
禽流感病毒分型结果表明，冲洗禽类污水、地面污水、宰杀或摆放禽肉案板的表面和禽饮用水、死禽或禽内脏、笼具、粪便等来自各类禽源的标本中均检出H5与H9亚型禽流感病毒。提示禽流感病毒既存在于鸡、鸭、鸽等禽体中，又广泛分布于污水、案板、粪便及笼具等各种外环境之中。H5和H9两种亚型同时检出率达13.33%,混合阳性在上述各类环境标本中普遍存在，为流感病毒发生基因重配提供了可能。2013年危害我国的H7N9亚型流感病毒的6个内部基因全部来源于近年在我国流行的H9N2亚型禽流感病毒 ，凸显了不同亚型禽流感病毒基因重配的潜在威胁性和公共卫生学意义。
市场调查发现，郧县市场以当地禽类为主，市区除本地禽类外，还大量从襄阳等地购入, 市场上汇聚来自各地的不同禽类，增加了禽流感发病的风险，可能是十堰市区比郧县的城乡活禽市场禽流感病毒污染状况更为严重的原因。
综上所述，该市面临一定的人禽流感发生风险。向妮娟等[9]研究发现，城市人感染高致病性禽流感病例以暴露于活禽市场为主，且活禽市场暴露是3个独立的危险因素之一。人感染禽流感的主要途径就是密切接触病死禽，危险行为包括禽类的宰杀、拔毛以及加工[2]。建议加强对活禽市场上市前病死禽的监管，加强交易结束后交易场所与屠宰场所的清扫消毒，增强交易人员的防护意识与防护措施，尽可能降低人禽流感发生风险。最好实行家禽集中屠宰，以便每天对禽类冲洗水、粪便、内脏、案板等高危器物进行集中消毒处理。二、四季度尤其要做到严格落实。另外，应继续加强外环境与职业暴露人群的禽流感监测研究，及时掌握禽流感病毒致病力和传播能力的改变情况，以采取更具针对性的防控措施。

参考文献
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