疾病监测, 2013, 28(11): 884-887
DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.11.005
Surveillance of avian influenza virus in population with occupational exposure and in out-environment in Quzhou, Zhejiang
CAO Guo-ping, ZHAN Bing-dong, CHEN Xu-fu, FENG Feng
Quzhou Center for Disease Control and Prevention, Quzhou 324000, Zhejiang, China
Abstract
Objective To understand the infection status of avian influenza virus in poultry and people with occupational exposure in Quzhou, Zhejiang province, and provide evidence for the prevention and control of human infection with avian influenza virus. Methods Totally 132 blood samples collected from people with occupational exposure and 231 out-environment samples were tested for avian influenza A viruses subtype H9 and H5 in Quzhou from 2009 to 2012. Results The overall positive rate of subtype H9 in 132 blood samples was 3.79%, the positive rate in people working in poultry markets was highest (10.53%). No subtype H5 was detected. In out-environment samples, the overall positive rate of avian influenza virus was 23.38%, and the positive rates of subtype H5 and H9 were 3.46% and 17.75% respectively. The positive rate of avian influenza virus was higher in poultry markets than in poultry farms, the difference in positive rate between subtype H5 and subtype H9 had no statistical significance. The positive rate of avian influenza virus in poultry drinking water samples was higher than feces and cage smears. The detection rate of subtype H9 was higher in drinking water samples than in feces and cage smears and in contaminated blood than in feces. The difference in subtype H5 detection rate had no statistical significance. Conclusion The infections of avian influenza A viruses subtype H9 and H5 were detected in poultry in Quzhou. The people engaged in poultry trade are at high risk to be infected. It is necessary to strengthen the prevention and control of human infection with avian influenza virus.
Keywords:    avian influenza virus   H5   H9   surveillance  

浙江省衢州市禽类职业暴露人群及外环境禽流感病毒监测分析
曹国平, 占炳东, 陈旭富, 丰峰
衢州市疾病预防控制中心, 浙江 衢州 324000
摘要
目的 了解浙江省衢州市禽类及职业暴露人群A型禽流感病毒（aivan influenza virus，AIV）的感染现状，以期为衢州市人感染高致病性禽流感的防控提供技术支持。方法 对衢州市2009-2012年采集132份职业暴露人群血清和231份禽类外环境标本进行AIV检测，并分析H9、H5亚型。结果 132份暴露人群血清H9亚型总阳性率为3.79%，以禽类交易场所最高，达10.53%，未检测出H5亚型；外环境标本中不同场所AIV、H5、H9亚型总阳性率分别为23.38%、3.46%和17.75%，禽类交易场所AIV阳性率高于规模化养殖场，H5、H9亚型阳性率差异无统计学意义；不同种类环境标本中禽类饮用水AIV阳性率分别高于粪便和笼具涂抹样；H9亚型阳性率禽类饮用水分别高于笼具表面和粪便，同时，污血也高于粪便，H5亚型阳性率差异无统计学意义。结论 衢州市禽类中存在H5、H9亚型的感染，且交易场所人员感染AIV的风险高于规模化养殖场，应做好重点人群的预防控制，防止人感染H5N1。
关键词:    禽流感病毒   H5   H9   监测  

内容大纲
1 材料与方法
1.1 标本来源及采集
1.2 检测方法
1.3 资料收集
1.4 统计学分析
2 结果
2.1 血清学检测
2.2 环境标本检测
2.2.1 不同场所AIV检测结果
2.2.2 不同类型标本AIV检测结果
2.2.3 不同月份环境标本AIV检测结果
3 讨论
　　禽流感是由A型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起的一种禽类(家禽和野禽)传染病。人感染高致病性禽流感(H5N1)后表现为从呼吸系统到全身严重败血症等多种症状，病死率很高[1]。对人类威胁大，有可能出现人传人的现象[2]。目前已知能感染人的有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2和H7N3亚型病毒株[3]。禽类作业环境可以增加感染禽流感病毒的危险性，禽类从业人群为感染禽流感的高危职业人群 。衢州市位于浙江省的西南面，四省通衢，人口流动大，且为丘陵地带，禽类养殖多，鸟类活动频繁，人类对禽流感病毒普遍缺乏免疫力，这些因素均对辖区人感染高致病性禽流感的防控造成了较大的压力。为了解衢州市禽类职业暴露人群及外环境中感染现状，特开展监测工作。
1 材料与方法
1.1 标本来源及采集
　　按照《浙江省职业暴露人群高致病性禽流感监测实施方案》要求，选择规模化养殖场、家禽散养户、禽类交易场所三类作为AIV监测点，暴露人群每年3月采血1次，35 ~40份(3～5 ml)；外环境全年分4次(3、6、9、12月各1次)，每次10 ~15份。三类场所采样份数平均分布。根据方案要求进行Hanks采样液的配置和标本采集：污水标本每份采集15~20 ml置于50 ml外螺旋盖的管内，采集场所主要包括禽类活动或笼具旁的水沟或水池的不同部位；禽类粪便标本从禽舍或环境中采集新鲜禽类粪便样品3~5 g，放入含5 ml采样液的采样管中；笼具表面涂抹则每个笼具采集一份标本放在一个单独的采样管中，用蘸有采样液的带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭笼具表面禽类最常接触的3~5个不同部位(包括笼具底部)，然后将擦拭过的拭子放入含5 ml采样液的采样管中，尾部弃去。也可以用多个拭子充分擦拭笼具表面后放到一个采样管中。各类标本采集后应在4 ℃条件下24 h内运送至实验室。
1.2 检测方法
　　将采集到的静脉血分离血清后-20 ℃保存，集中采用马红细胞血凝抑制试验检测H5N1、H9N2抗体(试剂由中国疾病预防控制中心流感实验室下发)，结果判断以血凝抑制试验滴度≥1 ∶ 160为阳性。外环境标本采用实时荧光定量-聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction, rRT-PCR)检测，病毒核酸提取：Ambion1836，核酸提取试剂盒(lot#1002029)，核酸反应：Ambion Agpath-ID one step RT-PCR kit (cat#AM1005,lot#0908048)。开始采用甲型流感病毒通用引物和探针，H5亚型引物由上游引物H5pf1673序列为GAC CAG CTA CCA TGA TTG CCA和下游引物H5pr1600序列为GGA GTC AAA TTT GGA ATC AAT GG组成的引物对，探针序列包括：探针H5pb1655序列为TGC TAG GGA ACT CGC CA及互补序列ACG ATC CCT TGA GCG GT；H9亚型由上游引物H9ｐｆ151序列为CCT GTG ACA CAT GCC AAA GA和下游引物H9ｐｒ302序列为CTT TCG ACR ATG TAG GAC CAT TC组成的引物对，探针序列包括：探针H9ｐｂ175序列为CTC CAC ACA CAG CAC AAT及互补序列为GAG GTG TGT GTC GTG TTA，分别检测H5、H9亚型。
1.3 资料收集
　　疫情资料来自卫生部、中国疾病预防控制中心网站人感染高致病性禽流感疫情公布信息及国内媒体报道资料。
1.4 统计学分析
　　采用Excel 2003及SPSS 18.0软件进行统计分析。两个独立的假设，显著水平设为0.05。如果在同一数据集上同时检验n(n>2)个独立的假设，此时采样Bonferroni校正。那么用于每一假设的统计显著水平，应为仅检验一个假设时的显著水平的1/n。
2 结果
2.1 血清学检测
　　2009 2012年，衢州市共采集职业暴露人群血清132份(其中2009年24份，其他3年各36份)，其中规模化养殖场88份，散养户25份，禽类交易场所19份。经检测，19份禽类交易场所血清H9亚型阳性2份，阳性率为10.53%；25份散养户血清检测H9亚型阳性1份，阳性率4.00%；88份规模化养殖场血清中H9亚型阳性2份，阳性率为2.27%，未检出H5亚型阳性血清。说明衢州市三类场所禽类职业暴露人群都存在H9亚型的感染，但三类职业暴露人群中血清抗体检测差异无统计学意义(χ2=3.07，P=0.135)，见表1。

表1 衢州市禽类职业暴露人群血清抗体检测结果
Table 1 Detection results of serum antibody in people with occupational exposure to AIV
从业人群标本数H5亚型
阳性数		阳性率
/%		H9亚型
阳性数		阳性率
/%
禽类交易场所1900.00210.53
散养户2500.0014.00
规模化养殖场8800.0022.27
  合计13200.0053.79


2.2 环境标本检测
2.2.1 不同场所AIV检测结果
　　2009 2012年，衢州市共采集标本231份(其中2009年51份，其他3年各60份)。检测结果显示AIV阳性率23.38%，H5亚型阳性率3.46%，H9亚型阳性率17.75%。表2、3表明，三类场所AIV阳性率分别为38.10%、31.58%和17.22%，禽类交易场所阳性率明显高于规模化养殖场(χ2=8.412，P=0.004)；三类场所H5亚型阳性率分别为9.52%、2.63%和1.99%，三者之间差异无统计学意义(χ2=4.79，P=0.071)； 三类场所H9亚型阳性率分别为28.57%、23.68%和13.25%，组间比较差异无统计学意义。

表2 衢州市不同场所禽类外环境标本AIV核酸检测结果
Table 2 Detection results of AIV nucleic acid in out-environment samples at different places
场所类别 检测数 AIV H5亚型 H9亚型
阳性数 阳性率/% 阳性数 阳性率/% 阳性数 阳性率/%
禽类交易场所421638.1049.521228.57
散养户381231.5812.63923.68
规模化养殖场1512617.2231.992013.25
   合计2315423.3883.464117.75


表3 衢州市不同场所不同组间禽类外环境标本统计值比较
Table 3 Comparison of statistical index of specimen from different places between different groups in Quzhou
组间(1) AIV H5 H9
χ2值 P值 χ2值 P值 χ2值 P值
1-20.3720.5421.6170.2030.2460.620
1-38.4120.0043.4020.0655.5800.018
2-33.8980.0480.0611.0002.5470.111
  注：(1):1代表禽类交易场所； 2代表散养户； 3代表规模化养殖场。

2.2.2 不同类型标本AIV检测结果
　　不同标本类型AIV、H9亚型阳性率不同。AIV的阳性率比较中禽类饮用水分别高于笼具表面和粪便(χ2=12.97，P=0.000；χ2=14.91，P=0.000)；H9亚型阳性率禽类饮用水分别高于笼具表面和粪便(χ2=9.73，P=0.001；χ2=17.69，P=0.000)，同时，污血也高于粪便(χ2=10.74，P=0.001)；H5亚型阳性率之间差异无统计学意义(χ2=2.06，P=0.541)。其他组间比较差异无统计学意义，见表4。

表4 衢州市不同类型禽类外环境标本AIV核酸检测结果
Table 4 Detection results of AIV nucleic acid in different out-environment samples
标本类型 检测数 AIV H5亚型 H9亚型
阳性数 阳性率/% 阳性数 阳性率/% 阳性数 阳性率/%
禽类饮用水311548.3926.451238.71
污血762330.2632.631925.00
笼具表面691014.4911.45811.59
粪便55610.9125.4523.64
合计2315423.3883.464117.75


2.2.3 不同月份环境标本AIV检测结果
　　对231份环境标本检测发现，第一、二、三、四季度AIV核酸阳性率分别为8.70%(4/46)、45.00%(9/20)、25.00%(20/80)和24.71%(21/85)，其中第二季度阳性率最高。
3 讨论
　　血清标本检测结果显示，H5亚型检测均为阴性，可能因素有多方面，还需要进一步研究。三类职业暴露人群中均存在H9亚型的感染，但阳性率差异无统计学意义，与柳洋等[6]研究不一致，可能是样本量不够有关。同时，衢州市H9亚型阳性率3.79%，处于孙虹等[7](2.17%)、柳洋等[6](3.94%)研究之间，有报道密切接触人群的H9亚型抗体阳性率比普通人群高，而且在健康人群中的隐性感染率也非常高[7]，衢州市具体情况有待进一步研究。
环境标本检测结果显示不同监测点AIV阳性率不同，交易场所高于规模化养殖场，与刘菊辉等[3]研究一致。外环境标本中普遍存在H5亚型感染，但三类监测点阳性率差异无统计学意义。调查中发现，禽类交易场所和规模化养殖场中均存在禽类发病及死亡现象，具体原因有待进一步研究。采样过程中也发现，交易场所禽类流动较大，且卫生环境较差；散养户环境卫生相对较差，而规模化养殖场有专人进行环境清扫和消毒工作，表明频繁的禽类流通和规范的清扫、消毒工作等可以影响环境中AIV的数量。同时，结果也显示不同种类标本中AIV核酸的检出率也有较大差异，饮用水阳性率高于粪便和笼具涂抹样，污血高于粪便。
世界卫生组织指出，只要环境中存在禽流感病毒，就存在着新的人禽流感病毒流行的危险，我国动物流感研究中心(AIRC)曾对部分地区商品蛋鸡场及养鸡专业村进行了禽流感血清学调查，发现H9亚型阳性鸡群占禽流感阳性鸡群的93.89%，证实了禽流感，尤其是中等毒力以下的H9亚型禽流感在我国广泛存在[7]，同时标本中检出H5 亚型阳性，提示H5型禽流感病毒高致病力的作用不可忽视。从事家禽养殖、饲养、运输、加工销售者为禽流感高危人群之一[3]，如浙江省2006年发生的首例人感染高致病性禽流感也提示接触病死禽类是人感染高致病性禽流感的可能原因[8]。同时，如果病毒进一步突变并同时具备了高致病性与人际间传播能力很有可能造成暴发流行，因此进一步加强禽流感病毒血清学和外环境监测对衢州市禽流感疫情的预警和防控有重要意义，通过分析暴露人群血清抗体水平和外环境感染情况，推断AIV感染影响因素，及时采取相应的控制措施，同时也可以为禽流感大流行的预警提供参考依据。

参考文献
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