1. No. 7 People's Hospital of Ningbo, Ningbo 315200, Zhejiang, China;
2. The First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 315000, Zhejiang, China;
3. Zhenhai District Center for Disease Control and Prevention, Ningbo, Ningbo 315200, Zhejiang, China

Objective To understand the etiological and epidemiological characteristics of infectious diarrhea in Zhenhai of Ningbo, Zhejiang province. Methods The stool samples of diarrhea patients were collected for the detections of Salmonella, Shigella, Diarrheagenic Escherichia coli, Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica, Aeromonas hydrophila, Plesiomonas shigelloides, Campylobacter, Rotavirus, Calicivirus, Astrovirus and Adenovirus. Results Of the 603 cases, 260 (43.1%) were positive for bacteria or virus. Vibrio parahaemolyticus (10.9%) was the most prevalent bacteria identified, followed by Diarrheagenic Escherichia coli (8.1%), Aeromonas hydrophila (4.0%), and the overall detection rate of Shigella, Vibrio cholerae and Salmonella was only 3.0%. Calicivirus and Rotavirus were the common virus with detection rates of 8.6% and 7.1%, respectively. The total pathogen detection rate in winter (60.4%) was much higher than in other seasons (34.7%, 49.8% and 35.0% in spring, summer and autumn, respectively). Bacterial diarrhea occurred more frequently in summer and adults aged 19-60 years were affected mostly, while viral diarrhea mainly occurred in the winter and children aged 0-5 years were affected mostly. Conclusion The major pathogens to cause infectious diarrhea in Zhenhai were Vibrio parahaemolyticus, Diarrheagenic Escherichia coli, Aeromonas hydrophila, Calicivirus and Rotavirus. The surveillance and management of aquatic products should be strengthened to reduce the incidence of infectious diarrhea.

Keywords:    infectious diarrhea   etiology   epidemiological characteristics  

1. 宁波市第七医院, 浙江 宁波 315200;
2. 浙江医科大学附属一院, 浙江 杭州 315000;
3. 宁波市镇海区疾控中心 浙江 宁波 315200

收稿日期：2013-10-15

基金项目：宁波市社会发展科研项目（No. 2011C50043）

通讯作者：曹利君，Tel：0574-86655231，Email：171686061@qq.com

目的 了解2011-2012年浙江省宁波市镇海区感染性腹泻病原谱及流行特征。方法 收集腹泻患者的粪便标本，进行沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弯曲菌的分离培养以及轮状病毒、肠道腺病毒、杯状病毒和星状病毒的核酸检测。结果 603份标本中阳性标本260份，总阳性率为43.1%。副溶血弧菌的检出率为10.9%，占细菌性病原的首位，其次为致泻性大肠埃希菌（8.1%）和嗜水气单胞菌（4.0%），而志贺菌、霍乱弧菌和沙门菌合计检出率仅为3.0%。病毒性腹泻以杯状病毒和轮状病毒常见，检出率分别为8.6%和7.1%。从病原总检出率来看，冬季检出率（60.4%）远高于其他季节（春、夏、秋季分别为34.7%、49.8%和35.0%）；细菌性腹泻多发生在夏季，成年人（19~60岁组）多见；而病毒性腹泻多发生于冬季，0~5岁儿童多见。结论 宁波市镇海区腹泻病原以副溶血弧菌、致泻性大肠埃希菌、嗜水气单胞菌、杯状病毒和轮状病毒为主，应主动加强水产品的监测和管理，减少感染性腹泻的发病率。

关键词:    腹泻   病原谱   流行特征  

中国是感染性腹泻的高发区，引起腹泻的病原菌种类很多，长期以来，临床实验室仅开展霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌或大肠埃希菌O157 ∶ H7的病原学筛查。2011年德国暴发严重的大肠埃希菌O104 ∶ H4疫情，给只注重部分病原的检测和防控策略敲响了警钟^[1]。目前，国内多个地区均有感染性腹泻病原特征的报道，但浙江省宁波地区缺乏相关数据，宁波地处中国东南沿海，腹泻病原谱及流行特征可能存在独特性，宁波市第七医院收集宁波市镇海区腹泻患者粪便标本开展病原监测，现报告如下。

1.1 标本收集和运送  

收集2011年1月至2012年12月镇海区人民医院、镇海龙赛医院、镇海区中医院以及2个社区医院腹泻患者的粪便标本(腹泻定义：每日排便3次或以上，且大便伴有水样、黏液样和脓血样等性状改变)。采样同时进行相关临床资料调查。采集的标本立即置于4 ℃冷藏。标本运送采用Cary-Blair培养基，48 h 内干冰包装送至浙江大学医学院附属第一医院。

1.2  标本检测  

按照国家科技重大专项传染病监测技术平台项目《腹泻症候群监测方案》要求的方法，粪便样本进行沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌(肠致病性大肠埃希菌、肠出血性大肠埃希菌、产肠毒素性大肠埃希菌、肠侵袭性大肠埃希菌和肠集聚性大肠埃希菌)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、嗜水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弯曲菌的分离培养以及轮状病毒(A、B 和C 组)、肠道腺病毒、杯状病毒(诺如病毒和札如病毒)和星状病毒的核酸检测。细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK全自动细菌分析仪及配套的鉴定板条进行。通过多重聚合酶链反应(PCR)方法检测12种毒力基因对致泻性大肠埃希菌进行鉴定和分型。病毒的检测均采用PCR方法。所有引物由上海生工生物工程技术有限公司合成，PCR相关试剂购自日本 TaKaRa公司。

1.3 数据分析  

调查数据和实验结果均录入国家传染病监测技术平台信息管理系统。数据导出后使用Excel 2007软件进行整理。

2.1 病例和标本分布  

2011年1月至2012年12月，共对603例腹泻患者开展了调查和粪便标本采集。其中3 5月(春季)收集144例(23.9%)、6 8月(夏季)251例(41.6%)、9 11月(秋季)160例(26.5%)、12 2月(冬季)48例(8.0%)；男性病例343例(56.9%)，女性260例(43.1%)；0～5 岁135例(22.4%)，6～18岁26例(4.3%)，19～60岁384例(63.7%)，>60岁58例(9.6%)。

2.2 病原谱  

603份标本中阳性标本260份，总阳性率为43.1%。其中仅检出细菌的标本172份(11份标本同时检出2种细菌)，阳性率为28.5%；仅检出病毒的标本88份(3份标本同时检出2种病毒)，阳性率为14.6%；细菌和病毒合并感染的标本有16份，占阳性标本的8.1%(16/260)。各病原检出率和构成比见表1。

表 1 宁波市镇海区603例腹泻患者粪便标本常见致腹泻病原检出情况
Table 1 Detection of common diarrhea pathogens in stool samples of 603 patients in Zhenhai

病 原	阳性 标本数	检出率 (%)	构成比 (%)
细菌
致泻性大肠埃希菌	49	8.1	26.8
肠集聚性大肠埃希菌	32	5.3	65.3(1)
产肠毒素性大肠埃希菌	8	1.3	16.3(1)
肠致病性大肠埃希菌	4	0.7	8.2(1)
肠侵袭性大肠埃希菌	3	0.5	6.1(1)
肠出血性大肠埃希菌	2	0.3	4.1(1)
副溶血弧菌	66	10.9	36.1
嗜水气单胞菌	24	4.0	13.1
志贺菌	9	1.5	4.9
沙门菌	6	1.0	3.3
弯曲菌	4	0.7	2.2
类志贺邻单胞菌	8	1.3	4.4
霍乱弧菌	3	0.5	1.6
小肠结肠炎耶尔森菌	2	0.4	1.1
其他气单胞菌属	8	1.3	4.4
其他弧菌属	4	0.7	2.1
病毒
杯状病毒	47	8.6	51.6
诺如病毒	38	6.9	80.9(2)
诺如病毒Ⅰ型	9	1.6	23.7(3)
诺如病毒Ⅱ型	29	5.3	76.3(3)
札如病毒	9	1.6	18.1(2)
轮状病毒	39	7.1	42.9
A组轮状病毒	37	6.8	94.9(4)
B组轮状病毒	1	0.2	2.6(4)
C组轮状病毒	1	0.2	2.6(4)
星状病毒	5	0.9	5.5
肠道腺病毒	0	0.0	0.0

  注：分别计算细菌和病毒中各病原的构成比； (1)致泻性大肠埃希菌中各型的构成比； (2)杯状病毒中诺如病毒和札如病毒的构成比;(3)诺如病毒中Ⅰ型和Ⅱ型的构成比； (4)轮状病毒中A、B、C三组的构成比。
2.3 分布特征  

从病原总检出率来看，冬季检出29例，检出率60.4%(29/48)，远高于其他季节，春夏秋分别为34.7%(50/144)、49.8%(125/251)和35.0%(56/160)；从细菌感染的检出率看，夏季检出93例，检出率37.1%(93/251)，明显高于其他季节，春、秋、冬分别为15.3%(22/144)、28.8%(46/160)、22.9%(11/48)；而病毒则是冬季的检出率最高，达37.5%(18/48)，高于其他季节，春、夏、秋分别为19.4%(28/144)、12.7%(32/251)、6.3%(10/160)。男性和女性检出率相近，分别为36.2%和35.7%；0~5岁组的病毒检出率最高达26.7%(36/135)，19～60岁组细菌的检出率高于其他年龄段组。病毒和细菌感染的流行特征见图1。

图 1 宁波市镇海区603例腹泻患者粪便标本的细菌和病毒感染流行特征
Figure 1 Epidemiological characteristics of viral and bacteria diarrhea in 603 patients

腹泻病是人类常见的、具有较高发病率和死亡率的疾病之一，据世界卫生组织报道全球每年约有20亿例腹泻患者，每年约有200万人死于腹泻病，尤其是在发展中国家，腹泻病高发是普遍存在的问题^[2]。2010 2012年海地霍乱暴发疫情和2011年德国大肠埃希菌O104 ∶ H4暴发疫情导致了严重后果^[1,3]，使人们意识到感染性腹泻的严重性，并积极做好防控策略，而对本地区腹泻病原谱及流行特征研究是防控策略中的重要步骤。本研究发现本地区腹泻患者粪便标本中副溶血弧菌(10.9%)位于细菌性病原的首位，其次为致泻性大肠埃希菌(8.1%)和嗜水气单胞菌(4.0%)，而志贺菌、霍乱弧菌和非伤寒沙门菌合计检出率仅占3.0%。病毒性腹泻以杯状病毒和轮状病毒常见，检出率分别为8.6%和7.1%。

目前，副溶血弧菌感染已成为我国一个严重的食源性公共卫生问题之一^[4]，感染率位于微生物性食源性疾病暴发之首^[5]。通过对海产品中副溶血弧菌的主动筛查发现，浙江省海产品副溶血弧菌污染率和人群感染率均较其他地区高^[5]。本研究中副溶血弧菌居细菌性病原的首位，且夏秋季的检出率为14.6%(60/411)，远高于冬春季的3.1%(6/192)，与市民在夏秋季喜欢生食、烧烤和腌制海产品等饮食习惯有关。另外，气单胞菌也是夏季腹泻的常见病原菌之一，该菌作为一种水源性和食源性致病菌广泛流行并常引起疫情暴发^[6]。本地区嗜水气单胞菌的检出率为4.0%，夏秋季的检出率为6.1%，冬春季为1.1%，加上其他气单胞菌检出率为5.3%(32/603)，与白永凤^[7]发现浙江省夏季门诊腹泻患者气单胞菌的分离率8.6%相近，在发达国家，腹泻患者中气单胞菌的分离率约为2.2%～10.0%^[8]，气单胞菌也是海产品中常见的寄生菌，该菌在本地区腹泻人群中的广泛流行应引起重视。

美国Baltimore和New Haven两地区对腹泻患者的研究显示，致泻性大肠埃希菌检出率远高于其他细菌，为9.4%(77/823)，其中肠集聚性大肠埃希菌占48.1%^[9]。朱敏等^[10]对河南郑州市和商丘市20家医疗机构收集的1534份腹泻患者粪便标本检测显示，致泻性大肠埃希菌检出率为10.4%，其中肠集聚性大肠埃希菌占34.6%。本地区致泻性大肠埃希菌的检出率为8.1%，与上述地区相近，其中肠集聚性大肠埃希菌构成高于上述地区，占65.3%。

人类杯状病毒是引起儿童和成人急性病毒性腹泻的主要病原，一般认为杯状病毒是仅次于轮状病毒引起急性腹泻的常见病原之一^[11]，但本地区杯状病毒的检出率高于轮状病毒(8.6% 和 7.1%)。2011 年7 12月上海市浦东新区的监测结果显示，诺如病毒的检出率为8.3%，札如病毒的检出率为1.4%，而轮状病毒的检出率仅为2.8%^[12]，宁夏地区2011年的监测也显示，杯状病毒是引起病毒性腹泻的主要病原，占65%，而轮状病毒仅占6%^[13]。说明杯状病毒可能已经取代轮状病毒成为病毒性腹泻最常见的病毒。另外，调查结果表明病毒性腹泻多发生于冬季，并且以0~5岁儿童多见，该结果与以往的报道一致^[14]。

综上所述，宁波市镇海区腹泻病原以副溶血弧菌、致泻性大肠埃希菌、嗜水气单胞菌、杯状病毒和轮状病毒为主，根据病原的流行特征，本地区应主动加强水产品的监测和管理，进而减少感染性腹泻的发病率。

[1] Frank C, Werber D, Cramer JP, et al. Epidemic profile of Shiga-toxin-producing Eschierichia coli O104:H4 outbreak in Germany[J]. N Engl J Med, 2011, 365(19):1771-1780.
[2] Kosek M, Bern C, Guerrant RL. The global burden of diarrhoeal disease, as estimated from studies published between 1992 and 2000[J]. Bull World Health Organ, 2003, 81(3):197-204.
[3] Barzilay EJ, Schaad N, Magloire R, et al. Cholera surveillance during the Haiti epidemic-the first 2 years[J]. N Engl J Med, 2013, 368(7):599-609.
[4] Liu XM, Cheng SY, Chen Y, et al.Active surveillance on Vibrio parahaemolyticus in retail seafoods from coastal areas of China in 2003[J].Chinese Journal of Food Hygiene, 2005, 17(2):97-99.(in Chinese) 刘秀梅, 程苏云, 陈艳, 等. 2003年中国部分沿海地区零售海产品中副溶血性弧菌污染状况的主动监测[J]. 中国食品卫生杂志, 2005, 17(2):97-99.
[5] Liu XM, Chen Y, Wang XY, et al.Foodborne disease outbreaks in China from 1992 to 2001 national foodborne disease surveillance system[J].Journal of Hygiene Research, 2004, 33(6):725-727.(in Chinese) 刘秀梅, 陈艳, 王晓英, 等. 1992 2001年食源性疾病暴发资料分析:国家食源性疾病监测网[J]. 卫生研究, 2004, 33(6):725-727.
[6] Janda JM, Abbott SL. The genus Aeromonas: taxonomy, pathogenicity, and infection[J]. Clin Microbiol Rev, 2010, 23(1):35-73.
[7] Bai YF. Virulence gene and drug susceptibility of Aeromonas isolated from diarrhea patients in Zhejiang[D]. Zhejiang University, 2011.(in Chinese) 白永凤. 浙江地区腹泻病人气单胞菌毒力基因及抗生素敏感性研究[D]. 浙江大学, 2011.
[8] Parker JL, Shaw JG. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease[J]. J Infect, 2011, 62(2):109-118.
[9] Nataro JP, Mai V, Johnson J, et al. Diarrheagenic Escherichia coli infection in Baltimore, Maryland, and New Haven, Connecticut[J]. Clin Infect Dis, 2006, 43(4):402-407.
[10] Zhu M, Xie ZQ, Zhao JY, et al.Research on the detection of five types of diarrheagenic eschierichia coli from dirrheal patients in Henan province[J].Modern Preventive Medicine, 2010, 37(6):1148-1150, 1152.(in Chinese) 朱敏, 谢志强, 赵嘉咏, 等. 河南省腹泻病人5种致泻大肠埃希菌感染调查[J]. 现代预防医学, 2010, 37(6):1148-1150, 1152.
[11] Fankhauser RL, Noel JS, Monroe SS, et al. Molecular epidemiology of "Norwalk-like viruses" in outbreaks of gastroenteritis in the United States[J]. J Infect Dis, 1998, 178(6):1571-1578.
[12] Fu YF, Sun Q, Zhu WP, et al. Analysis of pathogen spectrum surveillance of diarrheal patients in Pudong New Area, Shanghai, 2011[J].Chinese Journal of Disease Control & Prevention, 2013, 17(3):246-250. (in Chinese) 傅益飞, 孙乔, 朱渭萍, 等. 2011年上海市浦东新区社区居民急性腹泻病病原谱监测分析[J]. 中华疾病控制杂志, 2013, 17(3):246-250.
[13] Liu X, Hao Q, Ma JT, et al. Etiology and epidemiology of infectious diarrhea in Ningxia, 2011[J]. Modern Preventive Medicine, 2014, 41(3):1-3. (in Chinese) 刘翔, 郝琼, 马江涛, 等. 2011年宁夏地区感染性腹泻病原谱及流行特征[J]. 现代预防医学, 2014, 41(3):1-3.
[14] Hao R, Li P, Wang Y, et al. Diversity of pathogens responsible for acute diarrheal disease in China[J]. Clin Infect Dis, 2013, 57(12):1788-1790.