世界范围内婴幼儿病毒性腹泻的发病率较高，常见的致腹泻病毒有轮状病毒(HRV)、杯状病毒(HuCV)、腺病毒(AdV)和星状病毒(AstV)。其中HRV是引起病毒性腹泻的最常见的病原体，几乎每个儿童在5岁以前都感染过HRV^[1]。因此，HRV引起了全世界的普遍关注，是目前病毒性腹泻的几种病原体中研究最深入的一种病毒。在我国，因腹泻入院的5岁以下儿童中有47.80%感染了HRV^[2]， 我国于1998年建立了以哨点医院为基础的5岁以下儿童HRV腹泻监测网，对HRV展开了连续和系统的监测。吉林省根据《全国病毒性腹泻监测方案 (2007年修订版)》的要求，将长春市儿童医院作为病毒性腹泻的监测哨点医院，开展了监测工作。为掌握吉林省监测哨点医院的病毒性腹泻的流行趋势，做好 吉林省病毒性腹泻的防控工作，本研究对长春市儿童医院2012年HRV的监测情况进行了分析。 1 对象与方法 1.1研究对象

长春市儿童医院2012年所有5岁以下(0~59月龄)腹泻住院患儿。 1.2 检测方法

收集病毒性腹泻患儿发病3日内的粪便标本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HRV。HRV阳性的标本需要进一步进行基因分型，毒株分型采用RT-PCR。 1.2.1 G血清型分型

一次扩增采用编码VP7基因的保守序列设计引物(正链引物VP7F，负链引物VP7R)，扩增基因的片段，二次扩增负链引物为基因保守序列 的公用引物(VP7R)，正链引物根据基因内不同血清型的特征序列设计一组分型引物(aAt8、aBT1、aCT2、aDT4、G3、G9)，这样从扩增 产物的特征分子质量大小即可区别HRV的不同血清型。

(1)核酸变性：在0.2 ml的PCR反应管中加入正链引物20 μmol/L VP7F和负链引物20 μmol/L VP7R各1 μl、RNA模板5 μl、DEPC处理过的水3 μl混合后放在PCR仪中98 ℃变性5 min后，立即放入冰中。

(2)反转录及第一轮PCR扩增： 向上述管中加入表 1 中的反应液，反应条件：50 ℃ 30 min，95 ℃ 15 min(94 ℃ 30 s，4 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min)×35个循环，72 ℃ 7 min。

(3)第二轮PCR扩增：向新的0.2 ml PCR反应管中加入下列(表 2 )反应液。反应条件：94 ℃ 3 min(94 ℃ 30 s，42 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min)×35个循环，72 ℃ 7 min。

其引物设计原理与G基因型分型类似，一次扩增引物(VP4F、VP4R)选择VP4基因内的保守序列，二次扩增负链引物选择不同基因型的特征序列，设计一组分型引物(1T1D、2T1、3T1、4T1、5T1、P^[11])，正链引物仍采用公用引物(VP4F)。

(1)核酸变性：在0.2 ml的PCR反应管中加入正链引物20 μmol/L VP4F和负链引物20 μmol/L VP4R各1 μl、RNA模板5μl、DEPC处理过的水3μl混合后放在PCR仪中98 ℃变性5 min后，立即放入冰中。

(2)反转录及第一轮PCR扩增：向上述管中加入表 1 反应液。反应条件：50 ℃ 30 min，95 ℃ 15 min(94 ℃ 30 s，42 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min)×35个循环，72 ℃ 7 min。

(3)第二轮PCR扩增：向一新的0.2 ml PCR反应管中加入表 2 反应液。反应条件：94 ℃ 3 min (94 ℃ 30 s，42 ℃ 30，72 ℃ 1 min)×35个循环，72 ℃ 7 min。

第二轮产物使用QIAxcel自动电泳仪进行分析，根据产物片段大小判定G和P型别。 1.3 资料分析

将采集样品的临床信息和实验室检验结果录入EpiData 3.0数据库，采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。 2 结果 2.1 HRV检出率

2012年长春市儿童医院住院患者总数19 552人次，5岁以下儿童17 629人次，腹泻患儿数1415人，采集粪便标本387份，同时收集相关临床资料387份。其中HRV阳性标本225份，阳性率为58.14%，HRV合 并其他致腹泻性病毒感染29份(7.49%)。 2.2 HRV分型检出率

对225份HRV检测阳性的样品，采用RT-PCR方法对HRV进行分型。HRV G分型结果显示，G9型占所有HRV阳性标本的49.33%(111/225)，其次为G3型占20.44%(46/225)，G1型占16.89% (38/225)，G2型占7.56%(17/225)，G3+G9型占0.89%(2/225)，未分型占4.89%(11/225)；HRV P分型情况显示，P^[8] 型占所有HRV阳性标本的77.33%(174/225)，其次为P^[4] 型占12.00%(27/225)，未分型占10.67%(24/225)。 2.3 流行病学特征

2.3.1 性别分布

225例HRV阳性患儿中，男性患儿占61.33%(138/225)，女性患儿占38.67%(87/225)，男女性别比为1.59 ∶ 1。经统计学分析，不同性别患儿间HRV检出率差异无统计学意义(χ²=1.444，P=0.229)。 2.3.2 年龄分布

HRV检出高峰主要在13~18月龄之间，检出率为65.48%(55/84)；其次为19~24月龄，检出率为60.00%(27 /45)；0~6月龄患儿检出率为57.31%(47/82)；7~12月龄患儿检出率为54.71%(93/170)；25~59月龄患儿检出率最低 (3/6)，见表 3 。经统计学分析，各年龄组患儿间HRV检出率差异无统计学意义(χ²=2.931，P=0.569)。

2012年HRV感染全年均有发生，检出高峰为11月，检出率为83.78%(31/37)；其次依次为12月79.07%(34/43)和1月69.05%(29/42)，见表 4 。

225例HRV阳性患儿中城市患儿占48.44%(109/225)，农村患儿占51.56%(116/225)，城乡比例为0.9 ∶ 1。经统计学分析，城乡患儿间HRV检出率差异无统计学意义(χ²=1.298，P=0.254)。 2.4 临床症状

主要表现为腹泻、呕吐、呼吸道症状以及发热。225例HRV阳性患儿均有腹泻症状，入院前平均腹泻(2.0±1.0)d，每日腹泻 (6.0±2.0)次，粪便性状全部表现为水样便；78.67%(177/225)的病毒阳性患儿出现了呕吐的症状，入院前平均呕吐 (2.0±1.0)d，平均每天呕吐(3.0±1.0)次，呕吐物性状以胃内容物为主，占94.35%(167/177)；出现了严重呼吸道症状的患儿占 35.56%(80/225)。 3 讨论

HRV是引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体，2012年长春市儿童医院5岁以下患儿HRV检出率为58.14%，接近于张晓杰等^[3]2007年在长春报道的58.60%，略高于张丽杰和方安^[4]报道的1979 2005年全国住院腹泻患儿平均HRV检出率46.00%。

HRV是呼肠孤病毒的一个属，根据其基因结构和抗原性可分为A~G 7个组，其中A组HRV主要感染婴幼儿。HRV共有11个节段的基因，其中基因4和基因7分别编码能够产生保护性中和抗体的中和抗原VP4和 VP7，HRV可根据VP4和VP7的抗原特性分为G血清型和P血清型。研究结果显示，2012年吉林省病毒性腹泻监测哨点医院G血清型分型中以G9为 主，占所有HRV阳性标本的49.33%，我国自1994年钱渊等^[5]首 次发现G9型HRV以来，国内不同地区相继检出，本次研究G9型HRV感染率的比例高于我国部分地区的G9检出率。分析2008-2012年吉林省HRV各分型检出率，2008 2010年G血清型均以G3为主，2012年而以G9为主，可能提示HRV G血清型在吉林省的流行型别有所变化，有待进一步的监测研究。P基因型分型中主要以P8为主，占所有HRV阳性标本的77.33%。2008-2012年吉林省HRV P血清型感染均以P8为主要型别，提示针对P8血清型研制的疫苗在吉林省可能会取得较好的疗效。

HRV易感人群主要为5岁以下的婴幼儿，2012年检出率最高的年龄段为13~18月龄，检出率为65.48%，与国内外相关研究报道的以2岁以下婴幼儿居多一致^[6]。婴幼儿HRV性腹泻全年均可发病，不同国家和地区的流行季节可能有所不同，但还是以秋季到冬季为主，可能是由于婴幼儿本身免疫力较低，气候因素影响下极易受到腹泻性病毒的感染。本次研究的HRV检出高峰主要集中在10月至次年1月，与国内外相关研究报道结果基本一致^[7]。本研究中的HRV阳性患儿均有腹泻的症状，且均为水样便，78.67%的阳性患儿出现了呕吐症状，35.56%的患儿出现了严重呼吸道症状，表明吉林省HRV阳性患儿的临床特征主要表现为腹泻、呕吐和呼吸道症状。

了解吉林省HRV腹泻分型、流行病学特征及临床症状，有助于查找发病的危险因素，探寻科学有效的预防控制措施，是科学防控疾病、有效降低发病率的关键。