自2013年2月19日上海市出现首例呼吸道感染患者死亡，紧接着华东地区先后出现不明原因重症肺炎死亡病例，2013年3月31日中国疾病预防控制中心(CDC)在3例患者标本中分离出甲型H7N9禽流感病毒 ，并对首次发现的新禽流感病毒亚型进行了报道^[1]。截止2013年5月30日，世界卫生组织公布，H7N9禽流感确诊病例132例，死亡37例^[2]。面对新发传染病，浙江省永嘉县CDC自2013年7月开始，与县农业局联合，对辖区活禽养殖场、农贸交易市场及宰杀场实施外环境监测，全面了解自然界中H7N9禽流感病毒分布情况，及时做好防控工作，最大限度杜绝病例发生。 1对象与方法 1.1对象

2013年7月至2014年2月，该县所有15家活禽养殖场、38家农贸交易市场和7家活禽宰杀场以及从全部232家农家酒店中随机抽取的8家农家酒店为研究对象，每月开展H7N9禽流感病毒的外环境标本的采集和检测。 1.2监测数量与方法

每月采集鸡(鸭)的咽喉分泌物90份，鸡(鸭)肛粪60份。不定期随机采集鸡(鸭)血、鸡(鸭)翅膀涂抹物、鸡(鸭)蛋涂抹物、鸡(鸭)宿涂抹物、鸡(鸭)下蛋槽涂抹物和鸡(鸭)住房地面水等标本若干份。 1.3采集方法

用无菌捻拭子拭取鸡(鸭)各种分泌物或涂抹物标本，置于含0.4 ml灭菌生理盐水的无菌玻璃管中，密闭4 ℃条件下24 h内送检。 1.4检测方法

试剂使用上海之江生物科技股份有限公司生产的禽流感病毒(2013)核酸测定试剂盒；仪器为ABI7500型号的实时荧光定量PCR仪。用罗氏RNA提取试剂盒处理标本，参照试剂盒说明书配制试剂和加样，将反应管置于定量实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)仪上，45 ℃×10 min和95 ℃×15 min循环一次，再按95 ℃×15 s→60 ℃×60 s，循环45次，单点荧光检测在60 ℃，反应体系为25 μl；基因H7、基因N9和内部对照品分别选用FAM、VIC和ROX荧光通道；以阈值线刚好超过DEPC-H₂O的最高点为阈值，对照Ct值判断结果。永嘉县CDC实验室和市动物疫病预防控制中心实验室负责检测工作。 1.5医学观察

对监测阳性场所的活禽密切接触人员采集咽拭子进行病毒检测，同时实行为期10 d的随访跟踪和预防指导。 1.6统计学方法

采用Excel和SPSS 17.0软件统计分析数据，率的比较采用χ²检验，P<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1基本情况

永嘉县位于浙江省东南部，瓯江下游北岸，东邻乐清市、黄岩市，西连青田县、缙云县，北接仙居县，南与温州市区隔江相望。总面积2674 km²，人口96.04万人，下辖8街道10镇915个行政村。 2.2监测结果

监测68个场所中7个场所检出H7N9禽流感病毒阳性，阳性率为10.29%(7/68)，其中活禽养殖场为20%(3/15)，农贸交易市场为10.53%(4/38)，而活禽宰杀场和农户酒店均为0%(分别为0/7，0/8)。

68个监测点中共采集鸭相关标本532份，均为阴性；采集鸡相关标本1138份，阳性率为2.02%(23/1138)，其中活禽养殖场的鸡标本阳性率2.25%(14/623)，农贸交易市场的鸡标本阳性率为阳性率2.54%(9/355)，二者比较差异无统计学意义(χ²＝0.08，P>0.05)；而活禽宰杀场和农家酒店的鸡标本阳性率均为0，见表 1。7个H7N9禽流感病毒阳性场所的活禽密切接触者26人，咽拭子病毒检测结果均阴性，未出现感染病例。

在出现阳性检测标本的活禽养殖场和农贸交易市场中，8个月监测期内有4个月出现H7N9禽流感病毒阳性标本，阳性率为50.00%。2013年10月阳性率最高，为5.84%(9/154)，其次是2013年9月，为4.49%(7/156)，另外是2014年1月3.57%(5/139)和2013年12月1.61%(2/124)，其余月份均为阴性。8个月阳性检出率比较，差异有统计学意义(χ²＝28.18，P<0.05)。

阳性标本分别为鸡咽喉分泌物、鸡肛粪和鸡下蛋槽涂抹物等，阳性率分别是2.02%(8/396)、2.54%(10/394)和6.10%(5/82)。不同月份监测标本见表 2。

2013年9月和10月检测到H7N9禽流感病毒阳性标本各7份，阳性率分别为7.29%(7/96)和9.46%(7/74)。阳性标本分别为鸡咽喉分泌物、鸡肛粪和鸡下蛋槽涂抹物等，阳性率分别是2.17%(3/138)、5.00%(6/120)和8.06%(5/62)。其他月份各类标本均阴性。 2.5农贸市场鸡标本H7N9禽流感病毒监测结果

2013年10月阳性率为4.00%(2/50)，2013年12月为6.06%(2/33)，2014年1月为8.47%(5/59)；阳性标本为鸡咽喉分泌物和鸡肛粪，阳性率为2.65%(5/189)和2.41%(4/166)。其余5个月和其他各类标本均为阴性。 2.6H7N9禽流感病毒阳性场所区域分布

7个被检测到H7N9禽流感病毒阳性场所，分别在2个街道和3个(乡)镇。其中县城街道2个农贸交易市场，检出病毒阳性的鸡来源于邻县的同一户供应商，无法继续追溯；瓯北街道1个农贸交易市场和1所养殖场，农贸市场的鸡来源于该所养殖场；碧莲镇1个农贸交易市场，鸡来源于农户自己家庭养殖；鲤溪乡和枫林镇分别1所养殖场。7个检测到H7N9禽流感病毒阳性的场所分布分散，相互间隔距离较远。 3讨论

近年来，因流感病毒的抗原漂移作用，禽流感病毒已跨越种间屏障，威胁着人类健康。在禽流感病毒中，H3、H5、H7和H9均可传染给人类。H5N1^[3]、H7N3^[4]、H7N7^[5]和H9N2^[6]等不同亚型禽流感病毒感染人的事件均曾报道。2013年我国在患者标本中分离到甲型H7N9禽流感病毒，发现了新禽流感病毒亚型。该病毒是否与以往禽流感病毒相同，还是在病毒来源和传播方式等环节有所不同，是固守在动物中流行，还是会在人类中蔓延，这些问题都需要进一步深入探索。所以，开展H7N9禽流感病毒外环境监测工作，收集自然界病毒相关信息与资料，对研究该病毒的来源和传播途径等环节尤其重要。

监测过程中，4个月7个不同场所检测到H7N9禽流感病毒，波及县内多个区域，且相互间隔甚远。在不同时间、不同地点和不同来源的活禽中检测到H7N9禽流感病毒，说明永嘉县多个自然环境场所，存在着相当数量的H7N9禽流感病毒。本次监测养殖场和农贸交易市场的鸡标本中检测到H7N9禽流感病毒，阳性鸡标本为咽喉分泌物、肛粪和蛋槽涂抹物，说明H7N9禽流感病毒主要存在于活禽呼吸道和肠道。曾有相关报道，农贸市场可能是H7N9病毒感染的危险因素^[7]，活禽暴露是人感染H7N9禽流感病毒的高危因素^{[8, 9]}。由此可见，该县存在着严重危险因素，极其可能引发人感染H7N9禽流感病例，必须特别重视，积极做好防控工作，避免相关人员发生感染事件。

从监测的标本中发现，鸡相关标本阳性率为2.02%，而鸭相关标本均为阴性，说明H7N9禽流感病毒在鸡群中存在的概率明显高于鸭群，该病毒可能更容易在鸡群中传播。由于本次监测时间短，监测数量有限，可能会引起结果误差，所以要继续开展外环境监测，延长监测时间，扩大监测数量；同时呼吁各防控部门开展外环境监测工作，分析结果是否存在类似现象，或从不同角度佐证H7N9禽流感的病毒来源与传播方式，为防控H7N9禽流感工作提供科学依据。

人感染H7N9禽流感病毒的主要传播途径是呼吸道传播，食入被病毒污染的食物、接触感染的禽类分泌物或排泄物也可能会感染^[10]，其他传播途径是否存在，目前尚不清楚。本次监测发现，与携带H7N9禽流感病毒的活禽有过密切接触的26名管理销售人员，均未曾感染，表明该病毒传播力有限。

26名密切接触者，均为农民，文化程度低。此类从事活禽工作的人群，对禽流感的防护意识差，禽流感相关知识的获得比较困难，而接触感染禽流感病毒的风险明显高于其他人群^[11]；目前还没有疫苗可以预防H7N9禽流感，所以，加强禽流感防控知识宣传尤为重要，建议从事活禽工作的人员，做好个人防护和手卫生^[12]，尽可能减少与活禽及其分泌物不必要的直接接触，最大程度规避H7N9禽流感病毒传播人类。