沙门菌(Salmonella)广泛存在于自然环境中，经粪-口途径传播感染人体后，引发腹痛腹泻等胃肠炎症状，严重者导致死亡。全球每年约有1600万沙门菌感染病例，其中60万例死亡^[1]。

沙门菌是我国食物中毒和胃肠炎最常见的病原菌之一。深圳市腹泻监测资料显示，2010-2013年，沙门菌是深圳市腹泻病原谱的首位致病菌。本研究从哨点医院采集儿科、门诊、住院患者的粪便标本，进行沙门菌的增菌、分离、鉴定，用血清分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分型，期望从中获得本地区沙门菌感染的部分流行病学资料及菌株的血清学、分子生物学特征。

选择深圳市第六人民医院(南山区人民医院)为哨点医院，该医院为南山区最大的综合性医院。2010-2013年从该医院儿科、门诊、住院部共收集1868份腹泻患者粪便标本，分离到沙门菌92份。沙门菌H9812，作为PFGE的分子质量标准，由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所惠赠。

沙门菌显色培养基(科玛嘉)，沙门菌诊断血清(宁波天润)，SeaKem Gold Agarose(Cambrex Bio Science Rockland)，XbaⅠ、限制性内切酶(TaKaRa公司)，蛋白酶K(BBI公司)。

VITEK DENSICHEK浊度仪(法国BioMérieux公司)，恒温水浴摇床(英国GRANT公司)，脉冲场凝胶电泳仪(美国Bio-Rad CHEF Mapper)，凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)，BioNumerics图像分析软件(比利时)。

从哨点医院儿科、门诊、住院部采集腹泻患者粪便标本，病例纳入标准为每日排便3次或以上，且粪便性状有改变呈稀便、水样便、黏液便或脓血便。每月采集至少60份腹泻病例急性期(发病3日内)的粪便样本、肛拭子或呕吐物标本，经SC增菌后接种沙门菌显色培养基，挑取可疑菌落，进行生化鉴定。

生化鉴定符合的菌株继续进行血清学分型，根据GB/T 4789.4-2010沙门菌检验中的要求，对沙门菌O抗原和H抗原进行鉴定。

对分离的沙门菌株和H9812分子质量标准菌株采用50 U 限制性内切酶XbaⅠ于37 ℃酶切2 h。电泳参数：电压6 V/cm，电场夹角120°，起始转换时间2.16 s，终末转换时间54.17 s，电泳18 h。用凝胶成像软件Quantity one-4.4.0获取图像，BioNumerics4.0分析图像，聚类分析采用非加权组平均法(unweighted pair group method with averages，UPGMA)方法和Dice系数，按tolerance1.5%，optimization1.5%绘制聚类图。

2010-2013年从哨点医院采集腹泻病例标本1868份，分离到92株沙门菌，总分离率为4.93%，经χ²检验，不同年份沙门菌分离率差异无统计学意义(χ²=7.176，P=0.066)，见表 1。

分离到沙门菌的病例中男性45例，女性45例，2例性别不详，性别间差异无统计学意义。

分离到沙门菌的病例年龄最小1月龄，最大75岁，5例年龄不详。不同年龄组分离率见表 2。经χ²检验，不同年龄组病例的沙门菌分离率差异有统计学意义(χ²=60.714，P=0.000)，分离率最高的是4~10岁组(23.21%)；<1岁组和>11岁各组的分离率差异无统计学意义(χ²=9.700，P=0.084)。

92株沙门菌分布于19种血清型，鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌居多，分别占38.04%和31.52%，见表 3。

由于部分菌株复苏不成功、污染或电泳效果不佳，92株菌中有61株成功进行了PFGE。结果显示，61株沙门菌可以分为41种PFGE带型，每种带型最多有7株菌。鼠伤寒沙门菌产生17个PFGE带型，主要带型为 T1型，肠炎沙门菌的带型为E1型，见图 1。

图 1 2010-2013年深圳市南山区哨点医院腹泻患者沙门菌PFGE聚类图谱 Figure 1 PFGE pattern of Salmonella isolates in sentinel hospital in Nanshan district,2010-2013

图选项

我国食品中沙门菌污染率较高，采自陕西省、四川省、广西壮族自治区、广东省、福建省、河南省、北京市和上海市的鸡肉中沙门菌污染率分别为50%、38.9%、65.3%、64.6%、42.4%、48.6%、64.6%和43.8%，平均污染率为52.3%^[2]。且沙门菌的血清型种类繁多，目前经鉴定的血清型达2500多种，误食被沙门菌污染的食物会引发胃肠道症状，严重者危及生命。

本次试验分离到沙门菌的病例中，4~10岁组腹泻病例沙门菌分离率最高，达23.21%，推测是可能是因为该年龄组儿童活跃好动，户外活动较多，接触沙门菌的机会多，且尚未养成良好的卫生习惯，容易造成沙门菌感染。分离率第2位的是1~3岁组，该年龄组的幼儿多数居家抚养，卫生状况较好，但由于年幼，卫生习惯不佳，故容易感染沙门菌。<1岁组和>11岁各组的分离率差异无统计学意义，<1岁组尚不具备活动能力，不容易接触到沙门菌污染的食品，11岁以上人群已经养成良好卫生习惯，因而沙门菌感染率相对较低。

本地区腹泻病例中主要是鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌，分别占38.04%和31.52%，与全国的情况基本一致^[3,4,5,6]。除此之外，一些地区腹泻病例中还常检出阿贡纳沙门菌、山夫登堡沙门菌、汤普逊^[5,6]等。食品中除了这两种血清型，还有印第安纳沙门菌^[7]、德尔卑沙门菌^[8]等检出。从业人员携带的沙门菌血清型分布有所不同，广州^[9]、泰州^[10]、张家港市^[11]等多地区从业人员携带的沙门菌以德尔卑为主，另外还有肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、阿贡纳、山夫登堡等血清型，比腹泻患者分离的血清型更多样化。

PFGE结果显示，有2起聚集性的沙门菌感染。其中1起是1对双胞胎，5月龄，分别于2012年9月13日和14日分离出2株罗森沙门菌(S12195和S12196)，这2株菌的PFGE带型完全一致，因此推测这是由于同一来源的罗森沙门菌导致的2名幼儿感染。

另外1起是2012年6月21日分离的3株肠炎沙门菌(S12088，S12089，S12090)，来自本辖区某街道的一户3口之家，1对夫妇和1位老人在家食用未煮熟的食物后导致3人同时腹泻，入院后分离到肠炎沙门菌，经PFGE检测带型完全一致。推测这是1起由于家庭聚餐导致的食物中毒事件。

由于进行PFGE的时间滞后，这2起感染事件都未能找到传染源，仅用于回顾性分析和材料积累。提示今后应该缩短PFGE的检测时间，争取在最短时间内得到PFGE电泳图谱，才能对传染病的调查和处置起到支持性作用。

PFGE除了用于传染病的暴发调查，还可用于主动监测散发病例，预警跨区域跨时间的传染病疫情。美国于1998年建立的基于PFGE技术的PulseNet网络就具备这样的功能，PulseNet通过分布各地的网络实验室的实际检测、报告和信息比对，能够主动识别食源性传染病病例成簇、可能的关联、开展病例调查、发现危险因素、追溯暴发来源和传播。2008年美国“花生酱事件”就是PulseNet发挥主导作用的典型案例。

我国广东省也报道了1起基于PFGE技术主动监测发现的韦太夫雷登沙门菌感染^[12]。随着PulseNet China在全国范围内的逐步建立和完善，PFGE技术会在国内传染病预防和控制中发挥重要作用。

(志谢：真诚感谢深圳市疾病预防控制中心扈庆华、李迎慧、石晓路医生的帮助及深圳市感染性腹泻监测项目。)