禽流感由A型流感病毒引起。A型流感病毒的不同亚型中H5、H7和H9等亚型可以跨越种属屏障传染给人类，引起人禽流感病例，其中H5N1和H7N9禽流感已成为全球公共卫生关注焦点^{[1, 2]}。浙江省金华市禽规模养殖业较发达，禽交易市场多而散，农村家庭散养禽现象较普遍，区域内也有候鸟等野禽聚集栖息地，存在传播扩散禽流感病毒的风险，2014年全市共发生人感染H7N9禽流感病例10例。为全面了解涉禽场所A型流感病毒分布情况，评估人禽流感发生风险，并为科学防控人禽流感提供科学依据，2014年本课题组加强了对全市涉禽场所A型流感病毒的监测工作。现将金华市2014年涉禽场所A型流感病毒监测结果分析如下。

在全市10个县(市、区)设立城乡禽交易市场、规模禽养殖场、禽散养村和野生候鸟栖息地四类场所作为监测点，每月全市采集50份以上外环境标本检测A型流感病毒。采集的环境标本包括养禽笼具表面涂抹物、禽粪便、禽宰杀加工器具涂抹物、禽宰杀加工清洗污水、禽饮水及其他(肺、肠等禽内脏废弃物)6类标本。涂抹物标本采集，用蘸有采样液的棉拭子在被采物体上涂抹禽类最常接触的3~5个不同部位，然后放入含5 ml采样液的采样管中；清洗污水和禽饮水标本采集，用15 ml外螺旋盖的采样管收集5~10 ml水；禽内脏和粪便标本采集，用棉签或镊子采集新鲜禽类粪便或内脏3~5 g，放入含5 ml采样液的采样管中。

标本采集后48 h内由金华市疾病预防控制中心(CDC)国家流感网络实验室完成A型通用流感病毒核酸实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测，阳性标本再进行H5、H7、H9亚型流感核酸检测[PCR反应体系用宝生物工程(大连)有限公司TaKaRa试剂盒，批号：Cat RR064A Lot AK2801 Exp.2015.1；Cat RR064A Lot AK3501 Exp.2015.10；所有核酸检测用引物、探针均由浙江省CDC流感参比实验室提供]。所有A型通用流感病毒核酸阳性标本上送浙江省CDC流感参比实验室进行复核确认。

标本信息通过传染病监测平台信息系统下载，建立Excel数据库，使用SPSS 17.0软件进行描述性分析和χ²检验，P<0.01判定为差异有统计学意义。

2014年全市10个县(市、区)共监测155个涉禽场所，其中禽交易市场109个(城区58个、乡镇51个)、规模禽养殖场14个、禽散养村27个和野鸟栖息地5个。155个监测场所中，检出A型阳性场所79个，场所阳性率为50.97%。其中A(H5)亚型阳性场所25个(阳性率为16.13%)，A(H7)亚型阳性场所48个(阳性率为30.97%)，A(H9)亚型阳性场所40个(阳性率为25.81%)，A其他未分型阳性场所34个(阳性率为21.94%)。共检测1445份涉禽环境标本，检出A型阳性382份，阳性率为26.44%。其中H5、H7、H9亚型和A其他未分型阳性率分别为4.29%、7.89%、14.26%和4.98%，见表 1。

109个禽交易市场共采集1110份标本，检出A型阳性场所74个、A型阳性标本373份，场所阳性率和标本阳性率分别为67.89%和33.60%；14个规模禽养殖场共采集72份标本，场所阳性率和标本阳性率分别为0.07%(1/14)和2.78%(2/72)；27个禽散养村共采集214份标本，场所阳性率和标本阳性率分别为11.11%(3/27)和1.87%(4/214)；5个野鸟栖息地共采集49份标本，场所阳性率和标本阳性率分别为20.00%(1/5)和6.12%(3/49)。4类场所的环境标本A型流感阳性率总体差异有统计学意义 (χ²=126.860，df=3，P<0.01)。经两两比较，禽交易市场标本阳性率均高于规模禽养殖场、禽散养村和野生候鸟栖息地3类场所(均P<0.003)；禽交易市场场所阳性率均高于规模禽养殖场、禽散养村2类场所(均P<0.01)，但与野生候鸟栖息地场所阳性率差异无统计学意义(P>0.01)，见表 2。

1445份标本中，各类标本A型阳性率从高到低分别为其他类型(肺、肠等禽内脏废弃物)59.09%(13/22)、禽宰杀加工清洗污水38.67%(70/181)、禽宰杀加工器具涂抹物37.96%(82/216)、禽粪便24.03%(161/670)、禽饮水19.87%(30/151)、养禽笼具表面涂抹物12.68%(26/205)。不同标本类型A型阳性率总体差异有统计学意义(χ²=66.04，df=5，P<0.01)。经两两比较，其他类型(肺、肠等禽内脏废弃物)、禽宰杀加工清洗污水、禽宰杀加工器具涂抹物的阳性率均高于禽粪便、禽饮水、养禽笼具表面涂抹物 (均P<0.001)。各类标本均检测出A(H5)、A(H7)、A(H9)和A其他未分型流感，见表 3。

全市10个县(市、区)环境标本均有通用A型流感病毒核酸阳性检出，阳性率在6.48%～41.11%，位居前3位的依次为义乌市(41.11%)、东阳市(39.20%)和开发区(34.02%)。不同地区检测阳性率总体差异有统计学意义(χ²=117.32，df=9，P<0.01)，2/3县(市、区)均检测出A(H5)、A(H7)、A(H9)和A其他未分型流感，见表 4。

全年112月采集的环境标本均有A型流感病毒核酸阳性检出，阳性率在6.06%～54.17%，不同月份检测阳性率总体差异有统计学意义(χ²=148.13，df=11，P<0.01)。冬春季(第一、四季度)A型阳性率为32.49%(296/911)，高于夏秋季16.10%(86/534)，经χ² 检验，两者差异有统计学意义(χ²=46.49，P<0.01)。112月A型及各亚型阳性率见图 1。

图 1 2014年1-12月环境标本A型及其各亚型流感病毒核酸阳性率变化 Figure. 1 Monthly positive rates of different subtypes of influenza virus，January-December，2014

图选项

675份有确切禽类来源的标本检测结果表明，鸡源标本A型阳性率为13.87%(52/375)，鸭源标本A型阳性率为20.56%(22/107)，鸽源标本A型阳性率为11.11%(6/54)，鹅源标本A型阳性率为14.29%(2/14)，≥2种禽源标本A型阳性率为21.60%(27/125)。54份鸽源标本均为养殖肉鸽的相关标本，均采自活禽交易市场，其中笼具表面涂抹物12份、禽粪便37份、禽饮水5份；6份阳性标本中，5份为粪便标本，1份为鸽笼内禽饮水。经两两比较χ²检验，差异均无统计学意义(P>0.001)，见表 5。

城区禽交易市场A型流感场所阳性率为67.24%(39/58)，乡镇禽交易市场A型流感场所阳性率为68.63% (35/51)，经χ² 检验，两者差异无统计学意义 (χ²=0.020，P>0.01)；城区市场环境标本A型流感阳性率为33.38%(223/668)，乡镇市场A型流感场所阳性率为33.94(150/442)，经χ² 检验，两者差异无统计学意义(χ²=0.040，P>0.01)，见表 6。

禽和涉禽场所暴露是发生人禽流感病例的重要原因^[3]。2014年金华市涉禽场所A型流感病毒检测结果显示，场所阳性率为50.97%，标本阳性率为26.44%，高于湖南省的监测结果^[4]，且10个县(市、区)、各类场所各种类型标本中均有A型流感病毒检出，提示金华市涉禽场所环境中A型流感病毒普遍存在，有发生人禽流感病例的风险。

从不同场所分析，虽然禽交易市场、规模禽养殖场、禽散养村和野鸟栖息地4类场所均有A型流感病毒检出，但97.64%(373/382)的阳性标本采自禽交易市场。禽交易市场的场所阳性率达67.89%，标本阳性率为33.60%，这与本课题组先前对活禽市场的研究结果基本一致^[5]，但高于李灵辉等^[6]在珠江三角洲7城市的活禽市场研究结果。而且，禽交易市场的标本阳性率均高于规模禽养殖场、禽散养村和野鸟栖息地3类场所；禽交易市场的场所阳性率均高于规模禽养殖场和禽散养村，但与野生候鸟栖息地间差异无统计学意义，这不排除野生候鸟栖息地监测场所(5个)过少，影响了检验效能。禽交易市场的阳性率高与该市2014年10例人感染H7N9禽流感病例中8例有明确的禽交易市场暴露史相一致，也与秦彦珉等^[7]报道的人感染H7N9禽流感病例中禽交易市场暴露史比例高的研究结果一致。从市场不同地域来看，城乡禽交易市场A型流感阳性检出率均较高，之间差异无统计学意义，这与本课题组先前得出城区市场阳性率高于农村市场的研究结果不一致^[5]。这是因为2014年该市乡镇市场阳性率比前3年提高了，表明A型流感病毒在乡镇禽交易市场分布越来越广泛，与该市2014年10例人感染H7N9禽流感病例中8例为农村病例的疫情相一致。金华市城乡市场A型流感病毒阳性检出率较高与该市城乡禽交易市场现状有关，上市禽只或禽产品来源广、品种杂，禽销售场所简陋狭小，部分市场仍存在活禽“现场挑选，现场宰杀”交易，多数市场存在清洗、消毒、休市等措施落实不到位等现象^{[5, 8]}。

从不同采样时间监测情况分析，冬春季为A型流感阳性检出的高峰期，这与相关研究结果一致^{[4, 6]}，也符合流感病毒的生物学特性^[9]。因此，冬春季为禽流感防控的重要时段，“季节性(冬春季)关闭活禽交易市场”应该是防控人禽流感的有效措施之一。

从不同标本类型监测结果分析，其他(肺、肠等禽内脏废弃物)标本、禽宰杀加工清洗污水和禽宰杀加工器具涂抹物标本阳性率较高，这与本课题组先前研究结果一致^[5]，也与湖南省、湖北省的研究结果相符^{[4, 10]}，提示禽宰杀环节所用的器具和水更容易被病毒污染，加强宰杀用具和污水的清洗消毒，做好活禽宰杀加工人员的个人防护和个人卫生至关重要。

监测结果表明，鸡、鸭、鸽等不同禽源标本的A型流感阳性率差异无统计学意义，与湖南省^[4]、珠江三角洲^[6]、金华市^[5]等地研究结果不一致，可能与地区差别及各研究中各类禽源标本的不同类型标本构成比例不同等有关。因为本次研究和相关文献均表明^[4]，不同类型标本的阳性率有差异。关于鸽源样本的监测，文献报道不多，本次监测发现鸽源标本A型阳性率为11.11%(6/54)，54份鸽源标本均为养殖肉鸽的相关标本，均采自活禽交易市场，其中笼具表面涂抹物12份、禽粪便37份、禽饮水5份；6份阳性标本中，5份为粪便标本，1份为鸽笼内禽饮水。说明肉鸽和其他家禽类的带病毒状况无差异。

以上研究结果提示，金华市城乡禽交易市场、禽宰杀环节和冬春季A型流感病毒检出率较高，存在传播扩散禽流感病毒风险。在冬春季加强禽交易市场监管，落实检疫准入、消毒、休市、关闭等措施，推广禽类“杀白上市”模式，是降低人禽流感发生风险的关键。