鼠疫是我国的法定甲类传染病，也是一个典型的自然疫源性疾病和人兽共患病。其宿主动物较多，已发现有233种啮齿目和兔形目动物在自然界中能感染鼠疫菌，是疫源地存在的稳定因素和基本条件^[1]。其他一些食肉动物和食虫动物对鼠疫菌低敏感、高抗性，染疫后大多数能自愈，并在体内长期保留鼠疫特异性抗体而被列为鼠疫指示动物。对指示动物进行血清学检测对发现疫源地、确定范围和流行动态等方面具有重要意义^[2]。贡山县地处滇西北怒江大峡谷北段，与云南德钦、维西、福贡和西藏自治区察隅县接壤，西与缅甸联邦毗邻。由于近年来此片区域的西藏芒康，四川巴塘、理塘等县先后证实为鼠疫疫源地或发现鼠疫相关线索^{[3, 4, 5, 6]}，而境外疫情不甚清楚，为了解该地鼠疫流行与分布情况，选择该县与德钦、西藏察隅邻近且有牧场分布的捧当乡、丙中洛镇、独龙江3个乡镇进行鼠疫指示动物血清流行病学调查。

2014年1011月，由云南省地方病防治所、怒江州疾病预防控制中心(CDC)、贡山县CDC组成20余人的疫源地调查队，对贡山县境内，地理位置分布于碧罗雪山西坡、高黎贡山东坡、担当力卡山东坡的3个乡镇(捧当乡、丙中洛镇、独龙江乡)6个自然村(迪麻洛、秋那桶、雾里、双拉、雄当、迪政当)19个村组，采用真空采血器采集村民家犬血清288份、猫血清5份。

鼠疫F1抗体检测间接血凝(indirect hemagglutination assay，IHA)试剂盒，由吉林博德医学免疫制品有限公司生产(批号：20140101)；双抗原夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒由兰州生物制品研究所有限责任公司提供(批号：20140401)；胶体金免疫层析试纸条(gold immunochromatography assay，GICA)由云南省地方病防治所自制(批号：201401)。使用设备为酶标检测仪Anthos 2010型和自动洗板机BIO-RAD 1575型。

分离血清后，56 ℃水浴灭活30 min，采用IHA微量法、双抗原夹心ELISA和GICA法检测鼠疫F1抗体。IHA检测采用“V”板法，初筛阳性者作抑制试验，当血凝抑制列呈阳性“++”凝集的孔比血凝试验列少2孔及以上时，可判定为特异性凝集；以出现反应强度“++”的最高稀释度作为滴度终点。ELISA初筛阳性者也需作确证试验。即用含F1抗原的抑制剂和样本稀释液同时平行检测，前者为验证列，后者为滴度列。以抑制列阳性反应孔数的滴度比滴度列低2孔或2孔以上者为验证阳性。ELISA被检测孔A₄₅₀(S)/阴性对照孔A₄₅₀比值的平均值(N)≥的2.1时(阴性孔A₄₅₀<0.1者，以0.1计)的最高稀释度作为滴度终点。GICA检测时，10 min内质控线和检测线均出现紫红色带判定为阳性。

本调查应用IHA、ELISA、GICA三种方法检测指示动物血清293份，其中犬血清288份、猫血清5份。IHA共检出阳性血清8份，阳性率为2.73%(8/293)，ELISA、GICA结果完全一致，均检出阳性血清11份，阳性率为3.75%(11/293)，见表1。血清滴度分布见表2。IHA、ELISA滴度检测时，均从1∶10 开始。

用四格表法对3种检测方法进行比较。ELISA与IHA比较，阳性符合率100%，阴性符合率98.95%，粗符合率98.98%，一致性系数Kappa(K)值0.84；ELISA与GICA比较，阳性符合率、阴性符合率、粗符合率均为100%，一致性系数Kappa(K)值为1。经χ²检验，ELISA法检出F1抗体阳性率优于IHA法(χ²=7.700，P<0.01)，而与GICA法无差异，见表3。

随着鼠疫防治研究工作的不断深入，指示动物在监测、调查中的重要性逐渐受到关注。我国把犬、猫、猪等非主要宿主动物列为鼠疫指示动物，相关研究也表明指示动物的血清抗体检测意义重大。云南省在已经证实的鼠疫流行地区指示动物血清阳性率为5%左右，高于家鼠血清阳性率^{[7, 8]}，广西隆林的调查也表明疫点屯指示动物F1抗体阳性率显著高于非疫点屯，也显著高于宿主动物鼠血清的阳性率^[9]。本次贡山县的调查中，以地理位置与西藏发现疫情的地区、有牧场分布的3个乡镇为调查采样范围，进行 指示动物血清学调查。293份血清中IHA阳性8例，ELISA、GICA各11例，阳性率分别达到了2.73% 和3.75%。阳性犬主要集中在迪麻洛村桶当组(2份)和从尼组(1份)、秋那桶村初岗小组(3份)和嘎嘎塘组(2份)、雾里村(2份)和雄当村(1份)。在对当地基本情况和地理景观的调查中发现，阳性点区域属于半农半牧区，夏季常带家犬到高山草甸从事放牧或采摘冬虫夏草等经济作物的生产活动。由于地形构造的特点，当地牧场呈点状分布，海拔均≥4000 m，这些区域暂未发现有旱獭分布，但流行病学调查证实这些阳性犬均有到过牧场的经历，其中抗体滴度最高的10号家犬主人回忆，家犬曾在牧场生重病几乎死去，提示牧场及其周边可能存在鼠疫菌感染动物。据不完全统计，鼠疫自然疫源地内犬血清F1抗体阳性率在5%~70%^[2]，虽然本次调查阳性率比此数据低，但如果以到过牧场的犬为对象来计算，阳性率将会大幅度提高。因为当地牧场离村庄距离较远，其他未到过牧场的被检动物不一定有机会接触到病原体，需加强以牧场为中心的鼠疫防治、调查研究和宣传教育工作。

IHA在鼠疫的诊断和监测中发挥了极其重要的作用，但存在操作繁琐、结果判定主观性强，温度、酸碱度、嗜异性凝集素等造成非特异凝集等不足。ELISA具有敏感、特异、操作简便、重复性好等优点，多数国家已将ELISA技术应用于鼠疫监测^{[10, 11]}。为得到客观、准确的结果,本次调查采用3种方法进行F1抗体的检测，结果表明，ELISA与IHA的一致性系数Kappa(K)值为0.84，经χ²检验，ELISA法检出F1抗体阳性率优于IHA法(χ²=7.70，P<0.01)。ELISA与GICA比较，阳性符合率、阴性符合率、粗符合率均为100%，一致性系数Kappa(K)值为1。因此在监测工作中，多种方法联合应用，不仅能有效保障检验速度和质量，更能为鼠疫防治工作提供准确可靠的数据。

(志谢：对参加本次疫源地调查的所有同志表示感谢！)