脊髓灰质炎(脊灰)是由脊灰病毒(Polioxirus，PV)经过粪-口途径传播引起的急性传染病，一旦感染可能会造成终身残疾。为了防控脊灰带来的危害，我国一直采用脊灰口服减毒疫苗(oral poliovirus vaccine，OPV)对适龄儿童进行免疫，多年的疫苗接种在我国建立了牢固的免疫屏障。内蒙古自治区(内蒙古)自1993年以来未发现脊灰野病毒(wild poliovirus，WPV)病例，但由于OPV在人体内复制增殖过程中有发生基因突变和毒力回复的可能，使得脊灰疫苗相关病例(vaccine associated paralytic poliomyelitis，VAPP)和脊灰疫苗衍生病毒(vaccine derived poliovirus，VDPV)病例出现并对居民健康存在一定威胁。本研究对内蒙古2012-2014年分离鉴定出的PV株进行分析，为维持无脊灰状态和改进免疫策略提供理论支持。

PV标本资料来源于急性弛缓性麻痹(AFP)监测信息报告管理系统及内蒙古脊灰实验室相关数据。粪便标本由各盟市疾病预防控制中心送检。

按照世界卫生组织(WHO)《脊髓灰质炎病毒检验手册》第4版进行病毒分离鉴定^[1]。分离病毒所用细胞为WHO推荐的L20B和RD细胞系。分离到的阳性毒株送国家脊灰实验室进行进一步分析。

PV毒株经实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，rRT-PCR)对型别进行鉴定，同时初步判断该毒株为疫苗株、VDPV还是WPV。随后毒株经过核酸提取、PCR扩增后，进行VP1区核苷酸序列测定，测序结果使用Sequencher 5.0软件进行序列比对，进一步确定毒株为疫苗株、VDPV还是WPV。

内蒙古2012-2014年共采集粪便标本1176份，分离到肠道病毒104株。其中PV 21株，经ITDⅠ型7株，Ⅱ型3株，Ⅲ型9株，混合型(Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ)2株；ITD结果显示有Ⅰ型VDPV 1株，其余20株均为疫苗株，另包含非脊灰肠道病毒(NPEV)83株。

粪便标本分别来自AFP病例、接触者和健康儿童，PV 21株，占1.79%；NPEV 83株，占7.06%。21株PV阳性株中，AFP病例分离到14株，占66.67%；接触者分离到2株，占9.52%；健康儿童分离到5株，占23.81%，见表 1，2。

21株PV中有2株为混合型毒株，这2株病毒分成6株单型后，与其他19株共同送国家脊灰实验室进行VP1区核苷酸序列测定分析，见表 3。结果与脊灰疫苗Sabin相比，其中1株来源于健康儿童的粪便标本核苷酸变异数为10个，VP1区核苷酸变异率为1.1%(10/906)，判定为Ⅰ型VDPV；其余最大变异数为8个，最小变异数为0个，均为疫苗株。

内蒙古自1993年以来未发现WPV，已经连续22年维持无脊灰状态。通过对AFP病例、密切接触者和健康人群的病原学监测，2012-2014年内蒙古PV阳性毒株3种型别均有发现，分别为Ⅰ型10株、Ⅱ型5株、Ⅲ型10株。Ⅱ型疫苗株相对较少，与笔者之前的研究结果相近^[1]。有研究显示，我国的优势株为Ⅱ型，与笔者的结果不同^[2]，由于内蒙古的脊灰阳性株较少，是否存在统计学差异还需进一步的数据累积。

内蒙古2012-2014年PV分离率为1.79%，肠道病毒分离率为7.06%。与全国相比较低。可能与内蒙古气候寒冷干旱，不利于肠道病毒繁殖与传播有关。内蒙古PV分离率历年来均维持在1%~2%，NPEV为5%~8%，两者差异无统计学意义。

2014年内蒙古开展了WPV的输入与传播风险评估工作，对评为高风险的地区开展了大范围的健康儿童标本采集工作，因此2014年检测标本数明显大于2012年和2013年，但AFP病例发病率及标本采集数并无显著变化。内蒙古2012-2014年从7个AFP病例中分离到14株PV(双份粪便标本)，最终临床诊断为VAPP 1例，格林巴利综合征1例，脊髓炎2例，急性偏瘫1例，肌炎1例，短暂性肢体麻痹1例。AFP病例中PV阳性率显著高于健康儿童和接触者，而肠道病毒分离率相对较低。AFP病例中PV阳性率高于其他两个人群，但7例阳性病例中仅有1例有流行病学证据显示可能是由于疫苗病毒引起AFP，没有证据显示脊灰疫苗引起的发病与PV阳性株分离率之间的必然联系。NPEV分离率的差异可能有季节性和采集对象年龄的原因，接触者粪便标本采集时间为2013年8月，正是肠道病毒繁殖传播最活跃的季节，分离率最高；健康儿童粪便标本的采集多在冬季，标本分离率相对较低。AFP病例采集的是15岁以下儿童粪便标本，接触者和健康儿童采集的为5岁以下儿童，为肠道病毒易感人群，这可能也是AFP病例便标本NPEV分离率偏低的原因。

在2012年和2013年分别在1例AFP病例和1例健康儿童中发现脊灰Ⅱ型高变异株，均有5个核苷酸变异；2014年在1例健康儿童中发现Ⅰ型VDPV，有10个核苷酸变异，变异率为1.1% (10/906)，提示病毒可能已经在环境中循环一定时间。病毒基因的变异有可能引起神经毒力回复，遇到人群免疫力下降或者其他因素就会引起发病^[3]。内蒙古在发现高变株和VDPV之后立刻采取相关措施进行调查处理，未发现相关病例以及cVDPV。我国长时间广泛使用OPV使VDPV的出现难以避免，而VDPV的传播对居民健康存在威胁，尽早发现VDPV甚至WPV，对其进行阻断是防控脊灰输入与传播的重要手段。内蒙古VDPV及高变株的发现表明相关检测体系具有很高的敏感性和及时性，AFP监测系统与环境监测工具相结合，能够在更大范围内发现PV，有利于及时发现和处置人群及环境中的WPV及VDPV，继续维持无脊灰状态。

内蒙古自1992年加入到全国脊灰实验室网络以来，均通过WHO历次盲样考核和现场认证，具备及时发现输入WPV、VDPV的能力。相对于AFP监测系统来说，健康人群的环境监测更能直接地反映出PV在环境中的存在状况^[4]，是AFP监测系统的必要补充，能够为制定消灭脊灰策略提供有力的支持。