2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析

疾病监测, 2013, 28(1): 25-27
DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.008

Surveillance of Shigella in Yuyao, Zhejiang, 2007-2011

LUO Xue-hui, ZHANG Jian-qun, ZHANG Yi, ZHANG Yi-ming

Yuyao City Center for Diseases Prevention and Control, Yuyao 315400, Zhejiang, China

Abstract

Objective To understand the infection status among the diarrhea patients in Shigella in Yuyao, Zhejiang province. Methods Stool specimens and anal swabs were collected from infectious diarrhea patients to conduct bacterium enrichment, isolation, biochemical identification, serotyping, drug susceptibility test and virulence gene PCR detection. Results Of 1360 specimens tested in 2007-2011, thirty-six were Shigella positive(2.65%). Among of them, four were S. flexneri 2a(11.11%), three were S. flexneri 2b(8.33%), eleven were S. flexneri 1d(30.56%), twelve were S. flexneri Xv(33.33%) and six were Shigella sonnei(16.67%). All the Shigella strains were multi-drug resistant. Conclusion From 2007 to 2011,S.flexneri was the major pathogen causing Shigellisis in Yuyao, and S. flexneri Xv is the predominant serotype. Antibiotic susceptibility results indicated that these strains were sensitive to aminoglycosides, quinolones and some cephalosporin. The virulence genes varied.

Keywords: Shigella surveillance drug-resistance virulence gene

2007-2011年浙江省余姚市感染性腹泻志贺菌监测结果分析

罗学辉, 张建群, 张一, 张怡明

余姚市疾病预防控制中心,浙江余姚 315400

摘要

目的了解浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌感染状况。方法采集感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本,进行增菌、分离、生化鉴定、血清分型、药敏试验和PCR毒力基因检测。结果 2007-2011年共检验标本1360份,检出志贺菌36株,检出率为2.65%,其中福氏2a志贺菌4株,占11.11%;福氏2b志贺菌3株,占8.33%;福氏1d志贺菌11株,占30.56%;福氏Xv志贺菌12株,占33.33%;宋内志贺菌6株,占16.67%;检出的志贺菌对多种抗生素耐药。结论 2007-2011年引起余姚市细菌性痢疾主要病原菌是福氏志贺菌,其次为宋内志贺菌;福氏志贺菌有多种血清型,其中Xv血清型分离率最高;药敏试验以氨基糖苷类、喹诺酮类及部分头孢类抗生素敏感性较好;毒力基因呈现多样性。

关键词: 志贺菌监测耐药性毒力基因

内容大纲

1 材料与方法

1.1 标本来源及分离培养

1.2 志贺菌血清型诊断

1.3 药敏检测

1.4 生化鉴定

1.5 毒力基因检测

2 结果

2.1 菌株检出情况

2.2 血清学分型

2.3 耐药性试验

2.4 毒力基因PCR检测结果

3 讨论

　　感染性腹泻是由病原微生物感染引起的以腹泻为主要临床特征的肠道传染病，严重危害人类健康，在我国发病率一直居高不下。在感染性腹泻中，志贺菌属引起的细菌性痢疾因分布广、症状重，可传播或暴发，而且转为重症菌痢的机会大，严重危害人们的身体健康，特别在老年人和婴幼儿中病死率较高^[1]。近年来，志贺菌的流行菌型不断变化，而且随着抗生素的广泛使用，其耐药性也日益严重。为了解和掌握浙江省余姚市感染性腹泻患者中志贺菌属的病原特征、耐药性及毒力基因携带状况，为临床治疗和流行病学研究提供依据，笔者于2007 - 2011年对浙江省余姚市综合性医院部分感染性腹泻的粪便标本进行检测分析，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源及分离培养
　　采集2007 - 2011年5-10月间余姚市人民医院和余姚市中医院两家综合性医院的肠道门诊感染性腹泻患者的粪便或肛拭标本进行分离培养。标本用Cary-Blair运送培养基保存运送。实验室收到标本后直接分离SS平板、麦康凯平板，36 ℃培养24 h；同时将样品置于GN肉汤增菌，36 ℃培养6 h后再用上述平板分离。从平板上挑取可疑菌落接种于克氏双糖琼脂36 ℃培养24 h，结果为-/+，H₂S(-)的用生化试验和志贺菌属诊断血清凝集试验进行鉴定。
1.2 志贺菌血清型诊断
　　志贺菌血清分型采用兰州生物制品研究所生产志贺菌分型试剂盒。
1.3 药敏检测
　　采用药敏纸片法。药敏纸片由杭州微生物技术有限公司提供。药敏试验按照纸片法抗菌药物敏感试验标准(WS/T 125-1999)。
1.4 生化鉴定
　　生化鉴定采用ATB Expression半自动细菌鉴定仪(法国梅里埃公司)；ID32E由法国梅里埃公司提供。
1.5 毒力基因检测
　　选择志贺菌侵袭质粒抗原H基因(IpaH)、志贺菌肠毒素1基因(SHET1)和 setlA 基因用普通聚合酶链反应(PCR)进行扩增检测。引物名称、序列及产物大小为：IpaH：F：5′-TGA AAC CGA TCA ACA ATC AT，R：5′-AGG GAG TGG TGG TAA AGA AC，242 bp。SHET1 因子：F：5′-GGC GTT ACG TGA AAG ATG GA，R：5′-GCT CAG TGG GAG TTT GTT GG，363 bp。setlA基因：F：5′-ATT CGT CCT CCC ATT CCT TC，R：5′-ATC CCA ACC ATA CAG CAA CT，475 bp。把细菌接种营养琼脂过夜培养，刮取菌落用煮沸法制备细菌基因组模板。反应体系为：50 μl总体积，10×PCR buffer(含Mg²⁺2.5 mmol/L) 5 μl，引物各40 pmol，dNTP各10 μmol，Taq DNA聚合酶2.5单位，模板2 μl。反应条件：94 ℃预变性3 min，94 ℃变性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共30 个循环，最后72 ℃延伸5 min，将扩增产物于加入适量gold view 的1.5%琼脂糖凝胶电泳上检测，用凝胶成像系统观察结果并保存。

2 结果

2.1 菌株检出情况
　　2007 - 2011年共检测感染性腹泻患者标本1360份，共检出志贺菌36株，检出率2.65%，见表1。

表1 2007 - 2011年感染性腹泻患者标本志贺菌检出情况
Table 1 Detection of Shigella in diarrhea patients' samples

年份	标本数	检出数	检出率(%)
2007	344	9	2.62
2008	169	2	1.18
2009	206	3	1.46
2010	440	19	4.32
2011	201	3	1.49
合计	1360	36	2.65

2.2 血清学分型
　　36株志贺菌经血清学试验，分为2个群5个型，其中福氏志贺菌30株，其中福氏2a志贺菌4株(占11.11%)；福氏2b志贺菌3株(8.33%)；福氏1d志贺菌11株(30.56%)；福氏Xv志贺菌12株(33.33%)；宋内志贺菌6株(16.67%)；福氏1d志贺菌均为2010年检出，见表2。

表2 36株志贺菌血清学分型情况
Table 2 Serotyping of 36 strains of Shigella

菌名	群抗原	抗原式	菌株数	构成比(%)
福氏2a志贺菌	B	Ⅱ：3，4	4	11.11
福氏2b志贺菌	B	Ⅱ：7，8	3	8.33
福氏1d志贺菌	B	Ⅰ：7，8	11	30.56
福氏Xv志贺菌	B	Ⅳ：7，8	12	33.33
宋内志贺菌	D	—	6	16.67

2.3 耐药性试验
　　7类共20种抗生素对36株志贺菌进行药敏试验，总耐药率为31.25%，其中对头孢西丁、头孢他啶、丁胺卡那、妥布霉素4种抗生素敏感率达100%；对奈替米星、庆大霉素、氟哌酸、氧氟沙星、亚胺培南、头孢噻肟敏感率较好，耐药率较低；而对青霉素类、阿莫西林棒酸、复方新诺明耐药率较高。福氏2b、福氏1d耐药率最高，分别为50.0%和48.64%，宋内、福氏2a和福氏Xv志贺菌耐药率较低，为32.5%、20.0%和13.75%。福氏2b、福氏1d和宋内志贺菌对头孢类有不同程度的耐药性，并且福氏1d对喹诺酮类药物相比其他血清型有较高的耐药性，见表3。
2.4 毒力基因PCR检测结果
　　选择其中的24株志贺菌进行毒力基因的检测，其中福氏2a 4株，福氏2b 2株，福氏1d 8株，福氏Xv 7株，宋内3株。24株志贺菌均检出IpaH 基因；SHET1 因子在3株宋内志贺菌均未检出，4株福氏2a志贺菌也有1株未检出；setlA基因只在1株福氏1d志贺菌未检出。

3 讨论

　　细菌性痢疾是由志贺菌引起的一种急性传染病，发病率较高，我国一般以福氏志贺菌和宋内志贺菌为主^[2]。笔者的监测结果也表明余姚市的细菌性痢疾病原以福氏志贺菌为主(占83.33%)。2007 - 2011年余姚市志贺菌的检出率在1.49%～4.32%波动，其中2010年的检出率为4.32%，高于另外4年的检出率。
36株志贺菌经初步鉴定共分出5种血清型，表明余姚市的腹泻患者志贺菌存在多样性，优势菌为福氏Xv，占33.33%，其次为福氏1d和宋内志贺菌，分别占30.56%和16.67%。福氏2a和福氏2b也偶有发生。福氏1d血清型为一种新的血清型，分别于2005年和2006年在我国的河南省和安徽省首次检出。研究表明，它能与型I和群7，8抗血清凝集，因此命名为1d。这种血清型是从X血清型通

表3 36株志贺菌对20种抗生素耐药情况
Table 3 Drug resistance of 36 strains of Shigella to 20 antibiotics

抗生素类别	福氏2a(n=4)		福氏2b(n=3)		福氏1d(n=11)		福氏Xv(n=12)		宋内菌(n=6)		合计(n=36)
抗生素类别	株数	耐效率(%)	株数	耐效率(%)	株数	耐效率(%)	株数	耐效率(%)	株数	耐效率(%)	株数	耐效率(%)
青霉素类
青霉素	4	100.00	3	100.00	11	100.00	2	16.70	6	100.00	26	72.20
氨苄西林	4	100.00	3	100.00	11	100.00	3	25.00	5	83.30	26	72.20
哌拉西林	2	50.00	3	100.00	11	100.00	2	16.70	2	33.30	20	55.60
β-内酰胺类
阿莫西林棒酸	4	100.00	3	100.00	11	100.00	12	100.00	6	100.00	36	100.00
头孢类
头孢唑林	0	0.00	3	100.00	11	100.00	1	8.30	2	33.30	17	47.20
头孢西丁	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00
头孢他定	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00
头孢呋辛	0	0.00	3	100.00	11	100.00	1	8.30	2	33.30	17	47.20
头孢哌酮	0	0.00	3	100.00	5	45.50	1	8.30	1	16.70	10	27.80
头孢塞肟	0	0.00	3	100.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	3	8.30
菌必治	0	0.00	3	100.00	1	9.10	1	8.30	1	16.70	6	16.70
氨基糖苷类
庆大霉素	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	6	100.00	6	16.70
丁胺卡那	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00
妥布霉素	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00
奈替米星	0	0.00	0	0.00	0	0.00	0	0.00	2	33.30	2	5.60
喹诺酮类
氟哌酸	0	0.00	0	0.00	2	18.20	0	0.00	0	0.00	2	5.60
氧氟沙星	0	0.00	0	0.00	11	100.00	0	0.00	0	0.00	11	30.60
环丙沙星	2	50.00	0	0.00	11	100.00	1	8.30	0	0.00	14	38.90
碳青霉烯类
亚胺培南	0	0.00	0	0.00	0	0.00	1	8.30	0	0.00	1	2.80
叶酸代谢抑制剂
复方新诺明	0	0.00	3	100.00	11	100.00	8	66.70	6	100.00	28	77.80
合计	16	20.00	30	50.00	107	48.64	33	13.75	39	32.50	197	31.25

过感染血清型转换噬菌体SfI而来。本研究发现2010年在余姚地区引起细菌性痢疾的病原主要是福氏1d，提示这种新的血清型开始在浙江省出现。是否会在今后流行或在更大范围保持一定的优势应密切监测。
检出的36株志贺菌对7类抗生素的药敏试验显示多重耐药，比以往检出的志贺菌的耐药率明显提高^[5]。对β-内酰胺类、青霉素类、叶酸代谢抑制剂、头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类和碳青霉烯类7类药物均有不同程度的耐药。对头孢西丁、头孢他啶、丁胺卡那、妥布霉素4种抗生素敏感率达100%；对奈替米星、庆大霉素、氟哌酸、氧氟沙星、亚胺培南、头孢塞肟敏感率较好，耐药率较低，这些抗生素在治疗时可以作为首选药。而对青霉素类、阿莫西林棒酸、复方新诺明耐药率较高。在今后的临床诊断治疗过程中，应加强对耐药性的检测，以便为临床合理用药提供必要依据。

参考文献

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