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文章信息
- 香金萍, 高德玉, 马生吉, 王安辉, 冯淑贤, 张雪莲, 李喜梅
- XIANG Jin-ping, GAO De-yu, MA Sheng-ji, WANG An-hui, FENG Shu-xian, ZHANG Xue-lian, LI Xi-mei
- 2011-2012年甘肃省武威市婴幼儿腹泻病毒监测结果分析
- Surveillance for viruses causing diarrhea in infants in Wuwei, Gansu, 2011-2012
- 疾病监测, 2014, 29(9): 704-708
- Disease Surveillance, 2014, 29(9): 704-708
- 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.09.009
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文章历史
- 收稿日期:2014-4-21
2. 甘肃省武威师范附属小学, 甘肃 武威733000;
3. 第四军医大学预防医学系流行病学教研室, 陕西 西安 710032
2. Primary School Affiliated to Wuwei Normal College, Wuwei 733000, Gansu, China;
3. Department of Epidemiology, School of Public Health, the Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, Shanxi, China
感染性腹泻是世界范围内影响儿童健康的常见疾病,每年导致约76 万5 岁以下儿童死亡[1],其中病毒性腹泻至少占感染性腹泻住院总人数的40%。导致婴幼儿病毒性腹泻的病原体以轮状病毒(human rotavirus,HRV)、人杯状病毒(human caliciviruses,HuCVs)、星状病毒(astrovirus,AstV)和肠道腺病毒(enteral adenovirus,EAdV)为主。为了解甘肃省武威地区婴幼儿病毒性腹泻的流行病学特征,本研究依据全国病毒性腹泻监测方案(2007 年修订版),对2011年1月至2012年12月武威市凉州区因腹泻住院5岁以下儿童的粪便标本进行HRV、HuCVs、AstV 和EAdV 检测。 1 材料与方法 1.1 研究对象
2011年1月至2012年12月武威市凉州区医院儿科5 岁以下因腹泻住院的儿童。按照《全国病毒性腹泻监测方案》采用统一的腹泻病例调查表采集患儿基本信息,并且采集患儿的腹泻粪便标本,于-20 ℃保存备用。腹泻诊断标准: 每日大便次数增加(3次)或大便性状发生明显改变(包括稀水样、蛋花样、黏液样或稀糊样等)。 1.2 实验室检测
取400 μl处理好的腹泻患者粪便标本上清液,使用Geneaid病毒核酸提取试剂盒,采用ROCHE 全自动核酸分离纯化仪进行核酸提取,操作方法及步骤依据说明书进行。采用DAKO公司生产的酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HRV抗原,操作步骤依据试剂盒说明书。轮状病毒ELISA检测阳性的标本进一步采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)进行基因分型,G血清分型,采用编码V7基因的保守序列设计引物,P基因分型选择VP4基因的保守序列。AMV反转录酶购自美国Promega公司,Taq酶购自上海Promega公司。对所有标本提取核酸后,同时进行人杯状病毒RT-PCR检测,腺病毒的PCR检测和星状病毒RT-PCR检测。PCR及RT-PCR扩增检测使用的引物及操作步骤严格按照《全国病毒性腹泻监测方案》执行。取10 μl扩增产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳,参照DNA Marker,依据扩增条带的有无及片段的大小判断结果是否是阳性,及判别病毒株类型。
所有样本检测在武威市疾病预防控制中心(CDC)完成,甘肃省CDC负责将轮状病毒检测阳性的标本随机抽取10%,杯状病毒所有的阳性标本,肠道腺病毒和星状病毒阳性标本的 50%,以及所有检测均为阴性的标本中随机抽取10%送往中国CDC进行病原确认和进一步分型。本研究报道的检测结果数据是经过各级CDC复核后的检测数据。 1.3 统计学分析
应用SPSS 13.0 软件对检测结果进行统计分析,率或构成比的比较用χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 基本情况
研究收集到5岁以下住院腹泻儿童资料632例,其中3岁以下婴幼儿630例,因此本研究仅针对3岁以下婴幼儿资料进行分析。630例腹泻婴幼儿资料,其中2011年321例,2012年309例;男性434例,占68.9%(434/630)。630例患儿的年龄在1~36月龄之间,6月龄以内婴儿341例,7~12月龄246例,13~36月龄43例,中位数年龄为6月龄。 2.2 病毒性腹泻病原体检测
630例婴幼儿病毒性腹泻病原体检测总阳性率为68.4%(431/630);2011年检测阳性率63.9%(205/321),2012年检测阳性率73.1%(226/309)。HuCVs、HRV、AstV和EAdV的阳性检出率分别为34.6%、34.0%、13.0%和10.6%。218份HuCVs阳性标本中诺如病毒(norovirus,NV)阳性195份,札如病毒(sapovirus,SaV)阳性23份。431份病毒性腹泻病原体阳性标本中307份为单一腹泻病毒感染,124份为多种腹泻病毒混合感染(101份检出2种病毒,20份检出3种病毒,3份检出4种病毒)。431份检出的病毒性腹泻病原体以HuCVs为主,其构成比为50.6%(218/431),其次 HRV占49.7%(214/431);腹泻病毒混合感染占所有病毒性腹泻的28.8%(124/431)。2011年腹泻病毒检测阴性、单一病毒阳性、2种以上病毒阳性的构成比性别差异有统计学意义(χ2=8.34,P=0.015),见表 1。124例混合感染样本中HuCVs阳性 98 份,HRV 阳性84份,AstV阳性56份,EAdV阳性36份。
腹泻病毒 感染状况 | 2011年 | 2012年 | ||||||||||
男(n=221) | 女(n=100) | 合计(n=321) | 男(n=213) | 女(n=96) | 合计(n=309) | |||||||
例数 | 构成比 (%) | 例数 | 构成比 (%) | 例数 | 构成比 (%) | 例数 | 构成比 (%) | 例数 | 构成比 (%) | 例数 | 构成比 (%) | |
阴性 | 90 | 40.7 | 26 | 26.0 | 116 | 36.1 | 60 | 28.2 | 23 | 24.0 | 83 | 26.9 |
单一病毒阳性 | 106 | 48.0 | 54 | 54.0 | 160 | 49.8 | 97 | 45.5 | 50 | 52.1 | 147 | 47.6 |
2种以上病毒阳性 | 25 | 11.3 | 20 | 20.0 | 45 | 14.0 | 56 | 26.3 | 23 | 24.0 | 79 | 25.6 |
2011年和2012年4种病毒性腹泻检出率比较显示,2012年HuCVs检出显著高于2011年检测率(45.0% vs. 24.6%,χ2=28.9,P=0.000),见表 2。2011年检出腹泻病毒205例(63.9%,205/321),2012年检出腹泻病毒226例(73.1%,226/309)。2011年与2012年腹泻病毒单一感染与混合性感染所占比例差异有统计学意义(χ2=15.1,P=0.001),2012年腹泻病毒的混合性感染所占比重显著增加,见图 1。腹泻病毒检测阳性率分析显示,2011年与2012年HRV与HuCVs阳性率较高,见图 2、3。
2.4 病毒性腹泻人群分布男、女婴幼儿病毒性腹泻病原体检出率分别为65.4%(284/434),75.0%(147/196),差异有统计学意义(χ2=5.7,P=0.02)。2011年腹泻病毒检测阳性率依次为 HRV 31.2% (100/321)、HuCVs 24.6%(79/321)、AstV12.5%(40/321)、EAdV11.2%(36/321);2012年腹泻病毒检测阳性率依次为HuCVs 45.0%(139/309)、HRV 36.9%(100/321)、 AstV 13.6%(42/309)、EAdV 10.0%(31/309)。6月龄以内婴儿检出率为64.5%(220/341),7~12月龄婴儿检出率74.0%(182/246),13~36月龄幼儿检出率为67.4%(29/43)。按上述月龄分组比较4种腹泻病毒检测情况,发现轮状病毒的检测率在各年龄组差异有统计学意义(χ2=16.4,P=0.0003),6月龄以内婴儿的轮状病毒检出率(27.0%,92/341)显著低于7~12月龄(42.8%,105/246)和13~36月龄(39.5%,17/43),见表 2。
腹泻 病毒 | 2011年(1) | 2012年(2) | ||||||||||
6月龄(n=177) | 7~12月龄(n=113) | 13~36月龄(n=31) | 6月龄(n=177) | 7~12月龄(n=113) | 13~36月龄(n=31) | |||||||
阳性数 | 阳性率 (%) | 阳性数 | 阳性率 (%) | 阳性数 | 阳性率 (%) | 阳性数 | 阳性率 (%) | 阳性数 | 阳性率 (%) | 阳性数 | 阳性率 (%) | |
HuCVs | 47 | 26.6 | 25 | 22.1 | 7 | 22.6 | 73 | 44.5 | 62 | 46.6 | 4 | 33.3 |
HRV | 43 | 24.3 | 46 | 40.7 | 11 | 35.5 | 49 | 29.9 | 59 | 44.4 | 6 | 50.0 |
EAdV | 24 | 13.6 | 11 | 9.7 | 1 | 3.2 | 13 | 7.9 | 17 | 12.8 | 1 | 8.3 |
AstV | 24 | 13.6 | 13 | 11.5 | 3 | 9.7 | 21 | 12.8 | 18 | 13.5 | 3 | 25.0 |
注:(1)2011年HRV检测阳性率在3个年龄组间差异有统计学意义(χ2=9.0,P=0.01);(2)2012年HRV检测阳性率在3个年龄组间差异有统计学意义(χ2=7.5,P=0.02)。 |
对214 份HRV-ELISA 阳性标本进行G、P分型鉴定。214 份样本中G 血清型与P 基因型以G3(38.3%)、G1(10.7%)、P[8](20.6%)、 P[4](12.6%) 型为优势株,见表 3、4。G型P型组合模式分析显示,G3+P[8](8.9%,19/214);G1+P[8](7.0%,15/214),G3+P[4](7.0%,15/214)。
HRV G分型 | 2011年(n=100) | 2012年(n=114) | 合计 (n=214) | |||
菌株数 | 构成比 (%) | 菌株数 | 构成比 (%) | 菌株数 | 构成比 (%) | |
G1 | 22 | 22.0 | 2 | 1.8 | 24 | 11.2 |
G2 | 4 | 4.0 | 12 | 10.5 | 16 | 7.5 |
G3 | 34 | 34.0 | 28 | 24.6 | 62 | 29.0 |
G4 | 4 | 4.0 | 7 | 6.1 | 11 | 5.1 |
G8 | 0 | 0.0 | 8 | 7.0 | 8 | 3.7 |
G9 | 8 | 8.0 | 8 | 7.0 | 16 | 7.5 |
未分型 | 28 | 28.0 | 49 | 43.0 | 77 | 36.0 |
HRV P分型 | 2011年(n=100) | 2012年(n=114) | 合计 (n=214) | |||
菌株数 | 构成比 (%) | 菌株数 | 构成比 (%) | 菌株数 | 构成比 (%) | |
P4 | 5 | 5.0 | 22 | 19.3 | 27 | 12.6 |
P6 | 1 | 1.0 | 16 | 14.0 | 17 | 7.9 |
P8 | 40 | 40.0 | 4 | 3.5 | 44 | 20.6 |
P9 | 18 | 18.0 | 1 | 0.9 | 19 | 8.9 |
P10 | 4 | 4.0 | 5 | 4.4 | 9 | 4.2 |
未分型 | 32 | 32.0 | 66 | 57.9 | 98 | 45.8 |
431份病毒性腹泻病原体阳性标本中,单一腹泻病毒阳性307份,腹泻病毒 混合感染124份。124份混合感染包括101份检出2种腹泻病毒,20份 检出3种腹泻病毒,3份检出4种腹泻病毒。2011年检测腹泻病毒混合感染45份,占2011年检出腹泻病毒阳性总数的22.0%(45/205);2012年检出腹泻病毒混合感染79份,占35.0%(79/226)。病毒性腹泻病原体检测阳性的患者中感染2种以上腹泻病毒的婴幼儿所占比例,2012年较2011年显著增加。124例混合感染的样本中,检出HuCVs 98份,RV 84份,AstV 56份,EAdV 36份。2种腹泻病毒感染以HRV合并HuCVs为主(46.5%,47/101)。AstV腹泻病毒主要以混合感染形式存在(82份检测阳性标本中,单一感染26份,混合感染56份)。 3 讨论
病毒性腹泻是婴幼儿时期的常见病和多发病,在我国是危害儿童健康的主要疾病。导致婴幼儿病毒性腹泻的最主要的病原体有HRV、NV、SatV、EAdV、SaV,其中NV与SaV属HuCVs;病毒性腹泻的病原体,在不同的地区、不同时期,不同人群中病毒性腹泻的病原体检测阳性的构成存在差异[2, 3, 4, 5, 6, 7, 8]。本研究分析了2011年和2012年武威市监测的婴幼儿腹泻标本腹泻病毒病原检测结果,显示武威市3岁以下因腹泻住院的婴幼儿腹泻病毒总的检出率为68.4%,提示武威市因腹泻住院的婴幼儿中病毒性腹泻所占的比例较大。监测结果显示,武威市HRV 在腹泻儿童粪便标本中的检出率为34.0%,高于2010 年广东省深圳市病毒性腹泻检测检出率25.3%[2],高于湖南省哨点医院监测的22.8%[3],高于广州市2011 2013年哨点医院监测的 21.6%[4],低于乌鲁木齐市住院儿童HRV阳性检出率45.6%[5],低于广州市某社区流动儿童腹泻患者中检出率44.6%[6],也低于兰州市2005 2007年病毒性腹泻检测结果[7],提示可能与武威市居民家庭饮食卫生习惯及家庭生活条件有关。武威地区HRV检测阳性率6~36月龄婴幼儿的检出率显著高于6月龄以内的婴幼儿,可能与6个月内的婴幼儿体内尚有来自母体的保护性抗体有关。有研究[8]综述了亚洲地区HRV主要分型为G1P[8],G2P[4],G3P[8]; 2009 2011年日本儿童HRV G3P8所占比例最高,其次为G1 P8[9]。本研究214例HRV阳性的标本,G 血清型以G3 型为优势株 P 基因型以P[8] 为主,HRV血清型与基因型的模式中,以G3,P[8] 为主要流行株,与文献[8]报道的亚洲地区HRV的主要分型相类似。
国外研究显示HuCVs,NV是HRV之外引起病毒性腹泻病的重要病原体,有研究认为随着HRV疫苗的研究和运用[10],NV将在儿童病毒性腹泻病原体构成中占主要部分。本研究结果显示武威市630例3岁以下婴幼儿腹泻标本中HuCVs 检出率为34.6%(218/630)高于HRV检出率(34.0%)。武威市婴幼儿病毒性腹泻病原体HuCVs病毒感染218例,其中包括NV阳性195例,SaV阳性23例。婴幼儿病毒性腹泻病原体NV检出率为31.0%(195/630),高于深圳市(20.1%)[2],乌鲁木齐市(14.2%)[5],上海市浦东新区(12.0%)[11],广州市(12.5%)[6],兰州市9.2%[7]等地的研究报道,说明武威市婴幼儿病毒性腹泻的病原体以HRV和NV为主。本研究结果表明EAdV 检出率为10.6%(67/630),高于广州市监测的7.8%[4]和兰州市的检出率4.4%[7];武威市婴幼儿腹泻标本 AstV 检出率为13.0%(82/630),高于乌鲁木齐市住院儿童病毒性腹泻AstV检出率(4.2%)[5],广州市社区流动人口儿童腹泻中检出率为6.4%[6],广州市哨点医院5岁以内腹泻儿童中检出率3.8%[4]。上述结果显示,武威市婴幼儿病毒性腹泻的病原体除以HRV、NV为主外,AstV和EAdV的检出率也高于既往省会城市的报道[4, 5, 6, 7],其中AstV主要以混合感染形式存在,具体原因有待于深入调查分析。
本研究检测的630份标本中,共检出腹泻病毒感染431份,其中混合感染124份,占病毒性腹泻阳性标本的 28.8%(124/431),占所有检测样本的19.7%(124/630),高于来自乌鲁木齐市(11.4%)[5],广州市(13.1%[6],4.8%[4]),湖南省(2.5%)[3] 的研究报道,提示武威地区婴幼儿病毒性腹泻病原体的混合感染比例较高,不容忽视。武威地区婴幼儿病毒性腹泻病原体混合感染以 HRV合并HuCVs为主(37.9%,47/124)。综上所述,武威地区婴幼儿腹泻的病原体以病毒性为主,病毒性腹泻的主要病原体是HuCVs(主要是NV)和HRV。2011年与2012年婴幼儿腹泻样本中各种腹泻病毒检测阳性构成比存在差异,表现在2012年HuCVs 所占比例显著增多,2012年婴幼儿腹泻样本中腹泻病毒的混合感染比例显著增加。限于本研究的调查资料采集未包括婴幼儿疫苗接种史、家庭卫生饮食习惯及家庭饮食、饮水环境等状况,样本的采集未能包括本月哨点医院的所有腹泻患儿,加上腹泻病毒检测技术本身存在的灵敏度与特异度的局限,本次研究结果尚不能全面揭示导致武威市2011年和2012年腹泻病毒病原体构成变化及其原因,未来武威地区婴幼儿病毒性腹泻的流行特征有待于后续的监测及深入研究。
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