疾病监测  2016, Vol. 31 Issue (10): 814-816

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罗丹, 尹小平, 王安东, 田延河, 梁臻, 巴特, 张江国
LUO Dan, YIN Xiao-ping, WANG An-dong, TIAN Yan-he, LIANG Zhen, BA Te, ZHANG Jiang-guo
中哈边境阿拉山口口岸亚洲璃眼蜱首次检测到Q热立克次体核酸
The first detection of Coxiella burnetii DNA from Hyalomma asiaticum at Alataw pass, China-Kazakhstan border area
疾病监测, 2016, 31(10): 814-816
Disease Surveillance, 2016, 31(10): 814-816
10.3784/j.issn.1003-9961.2016.10.005

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收稿日期：2016-04-26
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罗丹, 尹小平, 王安东, 田延河, 梁臻, 巴特, 张江国. 中哈边境阿拉山口口岸亚洲璃眼蜱首次检测到Q热立克次体核酸[J]. 疾病监测, 2016, 31(10): 814-816.
LUO Dan, YIN Xiao-ping, WANG An-dong, TIAN Yan-he, LIANG Zhen, BA Te, ZHANG Jiang-guo. The first detection of Coxiella burnetii DNA from Hyalomma asiaticum at Alataw pass, China-Kazakhstan border area[J]. Disease Surveillance, 2016, 31(10): 814-816.
中哈边境阿拉山口口岸亚洲璃眼蜱首次检测到Q热立克次体核酸
罗丹1, 尹小平2, 王安东2, 田延河2, 梁臻2, 巴特2, 张江国2     
1. 石河子大学医学院, 新疆 石河子 832000;
2. 阿拉山口出入境检验检疫局, 新疆 阿拉山口 833418;
3. 新疆石河子大学动物科技学院, 新疆 石河子 832000
收稿日期: 2016-04-26
基金项目: 国家质检总局科技计划项目（No.2016lk264）
作者简介: 罗丹, 女, 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市人, 硕士研究生在读, 主要从事临床医学研究
通信作者: 尹小平, Tel:0909-6995844, Email:yxpciq@163.com.
摘要: 目的 对新疆阿拉山口口岸地区蜱类进行Q热立克次体核酸检测。 方法 采集蜱样本并进行形态学和分子生物学鉴定。聚合酶链反应扩增Q热com1基因，通过Blast软件比对分析测序产物，利用Mega 6.0软件构建分子遗传进化树。 结果 共采集253只蜱，其中优势蜱种为亚洲璃眼蜱，蜱类的形态学鉴定与分子生物学鉴定结果一致。阿拉山口口岸地区蜱携带Q热立克次体核酸平均阳性率为16.21%（41/253），亚洲璃眼蜱阳性率为22.65%（41/181），血红扇头蜱、短垫血蜱和边缘革蜱均为阴性，亚洲璃眼蜱显著高于其他蜱种。序列分析显示与Coxiella burnetii Cb175_Guyana（HG825990，圭亚那）进化关系较近，核苷酸同源性为99%。 结论 阿拉山口口岸地区亚洲璃眼蜱在16S rRNA和COⅠ基因序列间存在多样性，并首次在中哈边境地区亚洲璃眼蜱中检测到Q热立克次体核酸。
关键词： Q热立克次体     com1基因     亚洲璃眼蜱     中哈边境地区    
The first detection of Coxiella burnetii DNA from Hyalomma asiaticum at Alataw pass, China-Kazakhstan border area
LUO Dan1, YIN Xiao-ping2, WANG An-dong2, TIAN Yan-he2, LIANG Zhen2, BA Te2, ZHANG Jiang-guo2     
1. College of Medicine, Shihezi University, Shihezi 832000, Xinjiang, China;
2. Alashankou Entry-Exit Inspection and Quarantine Authority of China, Alashankou 833418, Xinjiang, China;
3. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Shihezi 832000, Xinjiang, China
Corresponding author: YIN Xiao-ping, Email:yxpciq@163.com.
Abstract: Objective To understand the Coxiella burnetii infection and genotype status in ticks at Alataw pass in China-Kazakhstan border area in Xinjiang. Methods The ticks were collected by drag-flag at Alataw pass. Coxiella burnetii was detected by using com1 gene primers with PCR. The PCR products were sequenced and analyzed with BLAST and phylogenetic tree was constructed with software Mega 6.0. Results A total of 253 ticks were collected at Alatawpass and the predominant tick species was H.asiaticum. And the morphological identification result was consistent with the molecular identification result. The average positive rate of Coxiella burnetii was 16.21% (41/253). The positive rate in H.asiaticum was higher than that in D.marginatus, H.erinacei and R.sanguineus. The positive rate of Coxiella burnetii in H.asiaticum was 22.65% (41/181). The sequencing analysis indicated that the Coxiella burnetii detected in H. asiaticum at Alataw pass shared 99% homology with the Coxiella burnetii Cb175_Guyana (HG825990). Conclusion In this study, the H.asiaticum at Alataw pass showed genetic diversity at 16S rRNA and in COⅠ gene sequence, and it was the first time to detect Coxiellaburnetii in H.asiaticum at Alataw pass in China-Kazakhstan border area.
Key words: Coxiella burnetii     com1 gene     Hyalomma asiaticum     China-Kazakhstan border    

Q热(Query fever)是人兽共患的自然疫源性疾病，目前被证实是一种重要的蜱传疾病，其病原体贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)亦被列为一种重要的生物战剂而备受各国关注[1]。人感染Q热后常表现为发热、头痛、肌肉酸痛，缺乏典型的临床表现，临床上多误诊为“流行性感冒”等。动物感染Q热后多呈亚临床经过，有时出现食欲不振，体重下降，产奶量减少和流产、死胎等现象[2]。自1937年Q热在澳大利亚被首次发现以来，目前已报道的Q热疫区遍及全球，我国经血清流行病学调查和病例证实，Q热分布遍及北京、黑龙江、四川、广东和西藏等省(直辖市和自治区)，其中部分地区还发生过Q热的暴发流行[3]。我国已从四川的铃头血蜱(Haemaphysalis campanulata)、新疆的亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum asiaticum)和残缘璃眼蜱(Hyalomma detritum)及内蒙古的亚东璃眼蜱(Hyalomma asiaticum kozlovi)等蜱种中分离出病原体，并证实其为当地的主要媒介蜱种[4]。

由于尚不清楚阿拉山口口岸地区是否存在贝氏柯克斯体，并且艾比湖自然保护区内有野生动物约167种(国家级保护动物38种，自治区级18种)，鸟类111种，约100万只，是鸟类重要的栖息繁殖迁徙湿地，一旦暴发Q热疫情将对保护区内的动物造成重大危害。本研究对阿拉山口口岸地区蜱进行Q热立克次体核酸检测，以了解阿拉山口地区Q热的感染状况，为“一带一路”蜱传疫病的科学防控、外来疾病预警体系的合理构架、公共卫生安全以及国际间疫病数据的共享等领域提供基础信息。

1 材料与方法 1.1 标本采集

2015年在阿拉山口口岸郊区和野外荒漠区设置4个蜱类采集点，利用白布旗法和动物体表采集法采集游离蜱。

1.2 形态学鉴定

参照Walker等[5]、邓国藩和姜在阶[6]对蜱传形态学的分类方法，利用体式显微镜进行种类鉴定。

1.3 DNA提取

按照DNA提取说明书[DNeasy® Blood & Tissue Kit (QIAGEN)]提取蜱DNA(1只/组)。将提取的DNA置于-20 ℃保存，备用。

1.4 分子生物学鉴定

PCR扩增亚洲璃眼蜱16S rRNA和COⅠ基因序列[7-8]，并对其进行序列分析。

1.5 Q热立克次体核酸检测

PCR扩增Q热立克次体com1基因[9]，选取阳性样本送北京鼎国生物科技有限公司进行测序。

1.6 Q热系统进化树分析

将测序结果进行Blast分析，利用Mega 6.0软件构建分子进化树，分析Q热立克次体com1基因序列特征。

2 结果 2.1 蜱类标本

共采获253只蜱，其中游离蜱192只，寄生蜱(虎鼬)61只。经形态学鉴定隶属1科3属4种，分别为血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)(2.77%，7/253)、亚洲璃眼蜱(71.54%，181/253)、边缘革蜱(Dermacentor marginatus)(1.58%，4/253)、短垫血蜱(Haemaphysalis erinacei)(24.11%，61/253)。亚洲璃眼蜱16S rRNA和COⅠ基因分子鉴定结果与形态学鉴定结果一致。序列分析结果显示：亚洲璃眼蜱在16S rRNA和COⅠ基因序列间存在多样性。

2.2 核酸检测

调查显示，阿拉山口口岸地区蜱携带Q热立克次体核酸平均阳性率为16.21%(41/253)，亚洲璃眼蜱阳性率为22.65%(41/181)，血红扇头蜱、短垫血蜱和边缘革蜱均为阴性，亚洲璃眼蜱显著高于其他蜱种。Q热com1基因Blast分析显示：阿拉山口口岸游离蜱Q热病原体贝纳柯克斯体基因型与Coxiella burnetii Cb175_Guyana(HG825990，圭亚那)和我国Coxiella burnetii strain XinQiao (AF317647，中国)均具有较高的同源性，同源性为99%。分子遗传进化树显示：与Coxiella burnetii Cb175_Guyana (HG825990)、Coxiella burnetii RSA 331(CP000890)、Coxiella burnetii strain XinQiao(AF317647，中国)聚为一支，与斑点热群立克次体、无形体和埃立克体处于不同分支，见图 1。

图 1 基于Q热com1基因构建分子遗传进化树 Figure 1 The phylogenic tree inferred from the Com1 sequences of the Coxiella burnetii 注：◆为本研究中的研究序列。
图选项
3 讨论

新疆于1959年首次用血清学方法证实乌鲁木齐市兽间存在Q热[10]，随后赖学琴和孔昭敏[10]以及张启恩等[11]在乌鲁木齐和阿克苏等地发现当地人群存在Q热感染。先前研究报道新疆精河县存在Q热自然疫源地[12]。近期研究表明，新疆伊犁地区人及家畜普遍存在Q热感染[13]，新疆9地区牛Q热血清抗体阳性为12.9%(41/318)[14]，夏尔西里自然保护区和尉犁荒漠地区蜱中未发现Q热感染[9, 15]。此次研究发现，新疆阿拉山口口岸蜱携带Q热立克次体核酸阳性率为16.21%(41/253)，当地居民存在感染Q热风险。

亚洲璃眼蜱广泛分布于新疆荒漠或半荒漠地区，为三宿主蜱，成蜱主要寄生于骆驼、牛、马、绵羊、山羊等家畜以及刺猬、野兔等，也侵袭人，幼蜱和若蜱多寄生于刺猬、野兔及其他啮齿类等小型哺乳动物。由于阿拉山口口岸游离亚洲璃眼蜱Q热立克次体感染率达22.65%(41/181)，因此该口岸的鼠类、虎鼬、北山羊等暴露于Q热感染的高风险中。建议在艾比湖湿地自然保护区旅游的游客，一旦被蜱虫叮咬，应及时妥善处理，当地疾病预防控制部门应加大对亚洲璃眼蜱的控制和Q热立克次体的检测。

阿拉山口口岸处于中哈边境地区，由于缺乏哈萨克斯坦对于Q热研究的相关数据，尚不能表明该口岸地区Q热在当地长期存在还是“外来入侵”。随着“一带一路”经济带的快速发展，中哈之间贸易往来将更加频繁，为蜱及蜱传疾病随交通工具、货物和人员往来传播提供便利条件。新疆艾比湖湿地自然保护区和夏尔西里自然保护区均位于中哈边境阿拉山口口岸地区，保护区内有大量野生动物和鸟类，增加了蜱和蜱传疾病随野生动物进行远距离传播的风险。为此，建议相关部门加强对边境口岸本地生物的调查和相关疾病的检测，严防“外来病”的入侵。

作者贡献:

罗丹：负责实验操作，数据分析，论文撰写

尹小平：负责课题规划，整体试验安排

王安东：负责采样，数据处理，实验操作

田延河、梁臻、巴特、张江国：负责媒介生物的采集及其他工作

参考文献
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