禽流感 (avian influenza，AIV) 是一种动物性传染病，主要感染家禽和鸟类，部分亚型可以传染人，引起严重的症状，甚至死亡^[1]。目前能感染人类的禽流感主要有H5、H7和H9等亚型^[2-4]。我国流行的H7N9病毒，已经造成多人死亡。浙江省温州地区禽类养殖场所和流通环节复杂。根据国家的监测方案，对温州市开展了禽类及其生活环境病毒监测，以了解禽流感的感染状况，从而采取有效的预防措施，现将结果报告如下。

根据《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案 (2011年版)》的要求，收集温州地区2011-2016年禽流感监测场所共1 885份标本，包括温州市12县 (市、区) 的养殖场、农贸市场和禽类批发市场。由疾病预防控制中心 (CDC) 的专业人员采集监测点的禽类及环境标本，包括禽的饮用水、环境污水，各种器具表面涂抹物等。每个地点每年监测4次，每次采样10~20份。

使用罗氏全自动核酸提取仪 (magana pure LC 2.0) 及相应配套试剂 (magNA prue total nucleic acid kit) 进行病毒RNA提取，实时荧光定量PCR (ABI ⅶA 7) 对标本进行A型流感病毒的检测，对阳性标本进一步分型检测H5、H7和H9。检测试剂使用上海之江生物和江苏硕世生物有限公司试剂。所有步骤严格按照监测方案和相应的商品说明书进行。

使用SPSS 19.0统计软件对数据分析统计。检验水准为α= 0.05，P < 0.05为差异有统计学意义。

共检测1 885份活禽场所标本，覆盖温州12个县 (市、区) 农贸市场、养殖场所和活禽交易市场。A型通用阳性1 003份，其中H5、H7和H9阳性数分别为184、289和162份，未分型454份。监测发现存在部分混合感染标本，H5+H7、H5+H9和H7+H9阳性数分别为42、67和30份。

温州市12个县 (市、区) 均检测到A型禽流感病毒，阳性率在20.4%~75.4%之间，平均53.3%。A型阳性率温州市龙湾区最高，为75.4%，其次为永嘉县和瑞安市，分别为61.0%和64.3%，泰顺县最低，为20.4%。H7各地区均有检出，平均阳性率15.3%。H5和H9感染率相对较低，平均9.2%，H5和H9瑞安市最高，分别为16.6%和18.4%。不同地区A型流感病毒阳性率差异有统计学意义 (χ² = 120.783，P < 0.05)。

2011-2016年A型流感病毒阳性率在18.3%~66.0%之间，高峰出现在2014年，主要由于H7亚型感染的快速上升，A和H7阳性率分别为66.0%和38.3%。2015和2016年H7有所下降，在20.0%以内，但A型阳性率仍达56.2%，主要与未分型感染的增多有关。H5阳性率在4.3%~13.3%之间，2011年最高，2013年最低。H9阳性率在3.3%~12.9%之间，2016年最高，2011年最低。不同年份A型流感阳性率不同，差异有统计学意义 (χ² = 23.870，P < 0.01)，见图 1。

图 1 2011-2016年温州地区禽流感病毒监测结果 Figure 1 Surveillance results of avian influenza virus in Wenzhou, 2011-2016

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不同月份A型流感阳性率波动明显，为16.0%~72.3%。H7阳性率最高出现在1月，为32.5%，最低出现在5月，为2.1%。H5和H9变化趋势比较接近，H5高峰出现在9月，阳性率为17.5%，H9高峰出现在1月，阳性率为13.5%。不同月份A型流感阳性率不同，差异有统计学意义 (χ² = 183.567，P < 0.001)，见表 1。

标本来自禽类养殖场所、活禽交易市场和农贸市场，其中禽类养殖场所禽流感A型阳性标本17份，阳性率为6.9%，活禽交易市场阳性标本253份，阳性率为52.8%，农贸市场阳性标本709份，阳性率为61.8%，不同场所禽流感病毒阳性率差异有统计学意义 (χ² = 244.548，P < 0.001)；禽养殖场所H5、H7和H9阳性率分别为2.1%、0.4%和1.2%，低于农贸市场的12.8%、17.9%和11.4%，见图 2。

图 2 2011-2016年温州地区不同监测场所禽流感病毒监测结果 Figure 2 Surveillance results of avian influenza virus in different sites in Wenzhou, 2011-2016

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采集活禽场所的粪便、饮用水、笼具、案板、污水和其他类标本。A型流感标本在禽粪便和饮用水阳性率较低，分别为35.4%和29.6%，而笼具、案板、污水和其他类标本阳性率高，分别为51.7%、65.4%、59.3%和57.7%；H5阳性率在其他类型标本最高，为16.7%，粪便标本最低，为3.1%，平均9.9%；案板标本H7阳性率最高，为21.1%，最低是粪便标本，为9.3%，平均为14.2%；其他类标本H9最高，为14.1%，最低是饮用水，为1.2%，平均为7.8%；不同种类标本间A型流感阳性率不同，差异有统计学意义 (χ² = 31.782，P < 0.001)，见图 3。

图 3 2011-2016年温州地区不同类型标本禽流感病毒监测结果 Figure 3 Sample specific surveillance results of avian influenza virus in Wenzhou, 2011-2016

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2013年上海市、浙江省和安徽省出现H7N9禽流感疫情，蔓延到全国多个省份，出现多例人感染H7N9疫情，病死率高。2011-2016年，温州市共发生21例人感染H7N9禽流感病例，死亡9例，病死率为42.9%。对2011-2016年温州地区外环境监测数据分析发现，活禽场所A型流感病毒阳性率平均为53.3%，高于厦门市^[5]、宁夏回族自治区^[6]等地，且H5、H7和H9不同亚型流感病毒均有检出，多种亚型并存，H7亚型的平均阳性率为15.3%，高于H5和H9亚型，禽场所H7N9的感染率达11.3%，提示温州地区禽流感感染情况不容乐观，H7N9依旧是重要的防控对象。未分型的禽流感病毒阳性检出率达24.1%，高于相邻的丽水市^[7]，推测温州地区可能存在除H7N9亚型以外的流感病毒，如在世界各地多次引起流感疫情的H5N8^[8]和H9N2^[4]等。流感病毒重配现象普遍，H7N9是重配形成的新亚型病毒，本次监测发现禽类混合感染情况普遍，如H5+H9、H5+H7和H7+H9，提示存在病毒重配的风险。在以后的监测工作中应加大未分型标本及混合感染的研究，密切监视这些亚型在温州地区的流行情况，防范可能的风险。

禽流感病毒的传播和流行与禽类的交易密切相关，监测发现温州地区活禽市场和农贸市场的禽流感病毒阳性率高于禽养殖场所，禽类运输的笼具、宰杀禽类的砧板及产生的污水病毒感染严重，增加人员的暴露机会，提示活禽交易和屠宰是禽流感的主要感染途径。温州地区禽交易量大，易导致易感人群感染^[9-10]。同时活禽很难溯源，不能及时追踪感染禽的来源，无法采取有效的处置措施。因此建立活禽溯源机制，采取有效的措施防止感染进一步扩散。

对于监测发现活禽市场H7亚型阳性率突然升高，且出现人感染H7N9病例时要及时采取措施，必要时实行活禽休市策略，能够有效降低病毒的流通，降低人接触带病毒活禽的概率。在应对禽流感疫情中，应规范活禽交易、建立集中的活禽交易和屠宰场所及有效的活禽溯源手段，定期开展相关场所的消毒，同时要根据温州市的实际情况，对重点高发地区，高发月份采取不同的监测方案和防控策略。

作者贡献:

孙宝昌  ORCID：0000-0002-7718-0463

孙宝昌：标本的收集、检测、结果分析和论文撰写

吴矛矛：负责外环境标本的整理、检测

朱传新：负责标本的收集、检测

陈栋：负责标本检测的质量控制、数据整理

郑文力：标本检测和数据分析

吴可可：标本收集、检测和后期文献查询