扩展功能
文章信息
- 陈涛, 谢娜, 符文慧, 关静
- Chen Tao, Xie Na, Fu Wenhui, Guan Jing
- 基于实时荧光定量PCR技术检测阿克苏市健康人群脑膜炎奈瑟菌携带状况
- Real-time PCR based detection of Neisseria meningitidis carriage in healthy population in Aksu, Xinjiang
- 疾病监测, 2018, 33(1): 59-62
- Disease Surveillance, 2018, 33(1): 59-62
- 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.01.014
-
文章历史
- 收稿日期:2017-11-01
2. 新疆医科大学, 新疆 乌鲁木齐 830054
2. College of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China
流行性脑脊髓膜炎(流脑)是由脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis, Nm)引起的急性呼吸道传染病,常在冬春季节发病和流行[1]。该病多发于儿童,起病急,人群隐性感染多,发病率、病死率均较高。Nm可分为12个血清群,目前发现的侵袭性病例中95%以上由A、B、C、Y、W和X血清群感染引起。无症状的带菌者被认为是该病的主要传染源,健康人群带菌情况与疫情趋势有一定的相关性[2]。新疆维吾尔自治区(新疆)阿克苏市为南疆重镇,随着经济水平的发展,外来人口增多,人群流动性大,导致其近年来流脑发病水平一直居于全疆前列。为了解阿克苏市健康人群Nm菌群分布和菌群变迁状况,为今后做好流脑疫情监测提供理论依据,本研究对阿克苏市健康人群进行Nm携带状况调查。
1 对象与方法 1.1 研究对象根据纳入对象要求,采用分层整群随机抽样的方法,按年龄段分为6组:<3岁、3~5岁、6~10岁、11~15岁、16~20岁、≥21岁,各年龄组采样对象>40人,剔除不合格样,最终选择调查对象250人。
1.2 标本采集采集研究对象1份咽拭子。生理盐水湿润,采集受试者悬雍垂后分泌物。
1.3 血清学检测 1.3.1 DNA提取将咽拭子标本在600 µl pH值7.40 PBS中进行洗脱,12 000 r/min离心5 min(离心半径33 cm),弃上清,沉淀用于提取DNA。运用QIAGEN试剂盒进行DNA的提取。
1.3.2 实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测运用real-time PCR鉴定Nm种属和基因群:应用ctrA基因鉴定Nm种属, 阳性者再进行A、B、C、X、Y、W常见血清群的real-time PCR检测。总反应体系为20 µl,分别是DNA模板2 µl,2×mix 10 µl,正、反向引物各1 µl,探针(10×)1 µl,ROX 0.4 µl,水4.6 µl。反应条件:按照TaKaRa DRR390A Mix设置反应条件:①95 ℃ 30 s 1个循环。②95 ℃ 5 s,60 ℃ 34 s,50个循环,终末收集荧光。
1.4 流行病学调查通过问卷调查,了解研究对象的性别、年龄、职业、疫苗接种史等相关信息,与实验室检测结果进行比对分析。
1.5 统计学分析采用Excel软件对检测数据进行录入整理,SPSS 18.0软件进行分析。对所得数据进行χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果 2.1 Nm的带菌率本研究共采集各年龄组健康人群咽拭子标本250份,其中real-time PCR检测出Nm阳性86份,带菌率为34.40%(86/250)。进行血清群检测,其菌群分布为B群32份阳性,占37.21%;C群15份阳性,占17.44%;X群24份阳性,占27.91%;Y群5份阳性,占5.81%;未分群10份,占11.63%。
2.2 不同年龄组带菌情况各年龄组健康人群带菌率不同,且差异有统计学意义(χ2 =24.476,P<0.05)。其中6~10岁年龄组人群带菌率最高,为54.39%,3~5岁年龄组人群带菌率最低,为13.51%,见表 1。
年龄组(岁) | 咽拭子数 | 阳性数 | 带菌率(%) |
3~ | 37 | 5 | 13.51 |
6~ | 57 | 31 | 54.39 |
11~ | 40 | 11 | 27.50 |
16~ | 40 | 19 | 47.50 |
>20 | 41 | 13 | 31.71 |
合计 | 250 | 86 | 34.40 |
不同人群的带菌率不同,且差异有统计学意义(χ2=19.016,P<0.05)。其中学生人群的带菌率最高(46.40%),其次是农民(40.00%),散居儿童的带菌率最低,仅为17.86%,见表 2。
女性健康人群的咽拭子数137份,带菌数50份,带菌率为36.50%,男性咽拭子数113份,带菌数36份,带菌率31.86%,差异无统计学意义(χ2 =0.590,P>0.05)。
2.5 接种不同剂次疫苗的带菌情况经统计分析,不同接种剂次人群的带菌率不同,且差异有统计学意义(χ2 =10.249,P<0.05)。其中无接种免疫史的健康人群带菌率最高,为39.78%,全程接种的人群带菌率最低,为11.43%,见表 3。
新疆是流脑高发地区,近年来流脑的发病率一直居全国前位,局部地区常有暴发流行[3],其中病例主要集中在南疆地区。研究健康人群携带Nm的带菌情况及血清群分布特征,可以用来监测和预警流脑的流行趋势[4],有效的防控流脑疫情的发生。
目前,对流脑的实验室诊断方法较多,包括分离培养、免疫学、real-time PCR检测等,其中分离培养、免疫学等传统方法检测的时间较长,且由于Nm在外环境十分脆弱,对干燥、寒冷、热、阳光等非常敏感,标本在运输途中易失效,同时受抗生素使用及其他非特异性因素的影响,使得Nm检出率低下[5]。real-time PCR近年来在病原检测领域广泛应用[6],是一种高灵敏度、高特异性的分子生物学检测技术,具有试验周期短、时效性强、污染环节易于控制等优点,且有研究表明使用real-time PCR法进行Nm的细菌学鉴定与分型具有灵敏、快速、准确的优势[7]。本研究运用real-time PCR检测技术对阿克苏市250份健康人群咽拭子标本进行检测,共检测出Nm阳性86份,带菌率为34.40%,均高于近年来其他省市的带菌率[8-10],提示目前阿克苏市存在流脑流行的可能,其流脑疫情的防控形式仍非常严峻。
本次研究中,6~10岁年龄组人群带菌率最高,为54.39%,3~5岁年龄组人群带菌率最低,为13.51%。学生带菌率最高(46.40%),其次是农民(40.00%),散居儿童的带菌率最低,仅为17.86%。学校人口密度大,人员较集中,易引起流脑的流行传播[11],故提高该部分人群的免疫接种水平,建立较好的免疫屏障,并对该部分人群开展健康教育及宣传,提高其防病意识,将有效的降低发病率。<3岁及3~5岁年龄组人群带菌率较低,可能与新疆自2008年9月开始将A群、A+C群流脑多糖疫苗纳入国家免疫规划,提高了该部分人群的免疫水平,证实了接种疫苗对防控疫情的重要性。本次研究中,女性健康人群的带菌率稍高于男性,差异无统计学意义。不同接种剂次健康人群带菌率不同,无接种免疫史的健康人群带菌率最高,且均高于各接种剂次的带菌率人群,其中全程接种的人群带菌率最低,提示全程有效的接种疫苗可降低人群的带菌率。
我国以往的流行菌株以A群为主,B群次之,C群少见。C群的致病力最强,B群次之[12],近年有B群、C群流脑引起流行的报道[13]。最近的研究结果显示,中国流脑病例流行菌群构成正在向多元化发展,A、C群流脑病例构成呈减少趋势,B、W135群、其他群及不可分群病例构成在增加[14]。阿克苏市历年流脑病例均以A群为主,但本研究菌群分布主要为B群、C群、X群、Y群和未分群,A群未检出,表明阿克苏市目前流脑流行菌群复杂,改变了以往流脑流行菌群单一的状态。A群未检出可能与流脑A群多糖疫苗注射保护作用有关。虽然B群较A群、C群毒力弱,人群多为健康带菌者[1],但尚无有效的疫苗预防其流行[15],一旦易感人群积累到一定程度,容易引起潜在的B群流脑暴发。
阿克苏市Nm流行菌群分布复杂,其中主要以B群及X群为主,提示其流行趋势依然严峻,存在流脑大流行的可能。应及时采取有效方法对重点人群开展流脑疫苗接种工作,并根据流行病学特征及菌群变迁情况,及时调整流脑疫苗免疫策略,以切实提高人群免疫水平;加强流脑监测工作,实时关注疫情发展,针对性的采取防控措施,防止流脑暴发、流行。
作者贡献:
陈涛 ORCID:0000-0002-6376-6877
陈涛:实验室检测,数据收集分析,论文撰写
谢娜:现场采样,实验室检测,论文指导
符文慧:问卷调查,数据收集
关静:现场采样
[1] |
薛伟华, 庞志钊, 张云, 等. 2015年平山县健康人群流行性脑脊髓膜炎监测结果分析[J]. 中国卫生检验杂志, 2016, 26(7): 1020-1021, 1024. Xue WH, Pang ZZ, Zhang Y, et al. Analysis of the surveillance results of meningomyelitis among healthy population in Pingshan in 2015[J]. Chin J Health Lab Tecechnol, 2016, 26(7): 1020-1021, 1024. |
[2] |
Claus H, Maiden MCJ, Maag R, et al. Many carried meningococci lack the genes required for capsule synthesis and transport[J]. Microbiology, 2002, 148(6): 1813-1819. DOI:10.1099/00221287-148-6-1813 |
[3] |
谢娜, 陈兆云, 陈涛, 等. 新疆阿克苏市一例暴发型流脑死亡病例调查分析[J]. 新疆医科大学学报, 2013, 36(11): 1667-1668, 1672. Xie N, Chen ZY, Chen T, et al. A survey analysis of fulminant meningococcal meningitis death case in Aksu Xinjiang[J]. J Xinjiang Med Univ, 2013, 36(11): 1667-1668, 1672. DOI:10.3969/j.issn.1009-5551.2013.11.033 |
[4] |
蓝荣伟, 刘民哲, 邓丽丽, 等. 健康人群脑膜炎奈瑟菌带菌率以及血清群分布特征研究[J]. 中国疫苗和免疫, 2014, 20(5): 438-441. Lan RW, Liu MZ, Deng LL, et al. Neisseria meningitidis carriage prevalence and serogroup distribution among a healthy population[J]. Chin J Vaccines Immuniz, 2014, 20(5): 438-441. |
[5] |
雷永良, 陈秀英, 叶碧峰, 等. 实时荧光定量PCR技术用于脑膜炎奈瑟菌的快速检测[J]. 中国卫生检验杂志, 2009, 19(11): 2586-2587. Lei YL, Chen XY, Ye BF, et al. Real-time fluorescent quantitative PCR for detection of Neisseria meningitidis[J]. Chin J Health Lab Technol, 2009, 19(11): 2586-2587. |
[6] |
王颖童, 孙印旗, 贾肇一, 等. 细菌分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应用于健康人群脑膜炎奈瑟菌携带率研究[J]. 疾病监测, 2016, 28(6): 443-446. Wang YT, Sun YQ, Jia ZY, et al. Carriage rate of Neisseria meningitidis among healthy population with bacterium culturing and real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction[J]. Dis Surveill, 2016, 28(6): 443-446. DOI:10.3784/j.issn.1003-9961.2013.6.007 |
[7] |
熊长辉, 杨梦, 袁辉, 等. PCR技术在流行性脑脊髓膜炎诊断中的应用研究[J]. 中国热带医学, 2009, 9(9): 1660-1661. Xiong CH, Yang M, Yuan H, et al. Rapid diagnosis of suspected epidemic cerebrospinal meningitis cases by PCR[J]. China Trop Med, 2009, 9(9): 1660-1661. |
[8] |
原灵, 林震宇, 王中敏, 等. 福建省2009年人群流脑带菌率及抗体水平监测[J]. 海峡预防医学杂志, 2012, 18(1): 29-31. Yuan L, Lin ZY, Wang ZM, et al. Neisseria meningitidis carriage prevalence and antibody level monitoring in Fujian, 2009[J]. Strait J Prev Med, 2012, 18(1): 29-31. |
[9] |
褚红娜, 魏峰, 赵国良, 等. 承德市2013—2014年流行性脑脊髓膜炎健康人群带菌监测分析[J]. 医学动物防制, 2016, 32(5): 494-496. Chu HN, Wei F, Zhao GL, et al. Surveillance on the rate of the healthy carrier from 2013 to 2014 of epidemic Neisseria meningitidis (Nm) in Chengde city[J]. J Med Pest Control, 2016, 32(5): 494-496. DOI:10.7629/yxdwfz201605008 |
[10] |
刘振武, 靳玉惠, 曾臻. 合肥市健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌率及抗体水平监测分析[J]. 医学动物防制, 2017, 33(7): 726-729. Liu ZW, Qi YH, Zeng Z. Investigation on immune level against epidemic cerebrospinal meningitis and carrier status among healthy population in Hefei[J]. J MedPest Control, 2017, 33(7): 726-729. DOI:10.7629/yxdwfz201707005 |
[11] |
邱德山, 徐东, 张宜东, 等. 高密市2013—2014年健康人群流行性脑脊髓膜炎带菌率调查与分析[J]. 微生物学免疫学进展, 2015, 43(6): 44-47. Qiu DS, Xu D, Zhang YD, et al. Investigation and analysis of carrier rate for Neisseria meningitidis among healthy population from 2013 to 2014 in Gaomi city[J]. Progress Microbiol Immunol, 2015, 43(6): 44-47. DOI:10.13309/j.cnki.pmi.2015.06.011.j.cnki.pmi.2015.06.011 |
[12] |
罗淑华, 张莉萍, 黄胜中, 等. 东莞市2004—2005年流脑监测结果分析[J]. 中国卫生检验杂志, 2006, 16(6): 701-702. Luo SH, Zhang LP, Huang SZ, et al. The analysis of meningococcal meningitis in Dong-twan from 2004 to 2005[J]. Chin J Health Lab Technol, 2006, 16(6): 701-702. DOI:10.3969/j.issn.1004-8685.2006.06.033 |
[13] |
杨洪桥, 李秀芝, 代国军, 等. 沧县2012年流脑带菌者检测结果分析[J]. 医学美学美容, 2014(8): 448-449. Yang HQ, Liu XZ, Dai GJ, et al. Analysis of the results of the detection of meningococcal meningitis in Cangxian county, 2012[J]. Med Aesthet Cosmetol, 2014(8): 448-449. |
[14] |
李军宏, 李艺星, 吴丹, 等. 中国2006—2014年流行性脑脊髓膜炎病例菌群分布特征及变迁趋势[J]. 中国疫苗和免疫, 2015, 21(5): 481-485. Li JH, Li YX, Wu D, et al. Epidemiological characteristics of meningococcal meningitis and switching trend of serogroups of Neisseria meningitidis in China, 2006-2014[J]. Chin J Vaccines Immuniz, 2015, 21(5): 481-485. |
[15] |
胡绪敬. 流脑流行的监测与预防[J]. 中国公共卫生, 2004, 20(5): 638-640. Hu XJ. Monitoring and prevention of meningococcal meningitis[J]. Chin J Public Health, 2004, 20(5): 638-640. DOI:10.11847/zgggws2004-20-05-94 |