副溶血弧菌的gyrB基因环介导的恒温扩增技术检测方法的研究

王虹玲 朱水荣 梅玲玲

引用本文: 王虹玲, 朱水荣, 梅玲玲. 副溶血弧菌的gyrB基因环介导的恒温扩增技术检测方法的研究[J]. 疾病监测, 2009, 24(8): 621-624. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961-2009.08.024 shu
Citation:  WANG Hong-ling*, ZHU Shui-rong and MEI Ling-ling. Study on loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique for detection of <I>Vibrio parahaemolyticus</I> based on the<I>gyrB</I> gene[J]. Disease Surveillance, 2009, 24(8): 621-624. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961-2009.08.024 shu

副溶血弧菌的gyrB基因环介导的恒温扩增技术检测方法的研究

摘要: 目的建立一种适合基层实验室应用和开展的快速检测副溶血弧菌的DNA环介导的恒温扩增法(LAMP)。方法针对副溶血弧菌的IgyrB/I 基因序列设计了4条引物(2条内引物、2条外引物),并对扩增反应条件进行了优化。结果整个检测过程仅需1.5 h,可通过肉眼目测或电泳检 测判断结果;对3株种系背景明确的副溶血弧菌不同实验对照株、23株副溶血弧菌地方分离株和32株其他肠道菌进行了检测,具有很高的特异性 ;该方法的最低检测限为24 cfu/ml,具有良好的敏感性;应用于61份贝类海产品的现场检测,阳性率为100%,与实时荧光定量PCR方法的检测 结果相符,阳性率高于传统的培养鉴定方法。结论本方法具有快速、灵敏、特异、简便、经济等特点,适合基层实验室、应急检测或现场监测 等使用,具有较高的推广价值。

English

    1. [1]Liu XM, Chen SY, Chen Y, et al. Active surveillance on <I>Vibrio parahaemolyticus</I> in retail seafoods from coastalareas of China in 2003 [J]. <I>Chinese Journal of Food Hygiene,</I> 2005,17(2):97-99.(in Chinese)
      刘秀梅,程苏云,陈艳,等.2003年中国部分沿海地区零售海产品中副溶血弧菌污染状况的主动监测[J].中国食品卫生杂志,2005,17(2):97-99.
      [2]Fang YZ, Bao FZ, Xu DG, et al. Jianggan district from 2001 to 2006, analysis of bacterial food poisoning pathogen[J].<I>Zhejiang Journal of Preventive Medicine,</I> 2008,20(1):45. (in Chinese)
      方叶珍,包芳珍,徐丹戈,等. 江干区2001-2006年细菌性食物中毒病原分析[J]. 浙江预防医学,2008,20(1):45.
      [3]Liu XM. Studies on the techniques for the monitoring and controlling food borneillness[J]. <I>Chinese Journal of Food Hygiene,</I> 2004,16(1):3-9. (in Chinese) 刘秀梅.食源性疾病监控技术研究[J]. 中国食品卫生杂志,2004,16(1):3-9.
      [4]Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, et al. Watanabe K, Amino N, Hase T: Loop-mediated isothermal amplification of DNA [J]. <I>Nucleic Acids Res,</I>2000,28(12):E63.
      [5]Tomita N,Mori Y,Kanda H,et al.Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of gene sequences and simple visual detection of products[J].<I>Nat Protoc,</I>2008,3(5):877-882.
      [6]Health ministry of Peoples Repbulic of China. GB/T 4789-2003.Microbiological examination of food hygiene[S]. Beijing: <I>Standards Press of China,</I> 2004:47-51. (in Chinese)
      中华人民共和国卫生部. GB/T 4789-2003食品卫生微生物学检验 [S].北京:中国标准出版社,2004:47-51.
      [7]Zhong K, Tian J, Li YP, et al. Faster detection of <I>Vibrio parahaemolyticus</I> in foods by PCR technique[J]. <I>Chinese Journal of Food Hygiene,</I> 2004,16(4):3-9. (in Chinese)  钟凯,田静,李业鹏,等.食品中副溶血性弧菌 PCR快速检测方法的研究[J]. 中国食品卫生杂志,2004,16(4):3-9.
      [8]Chen L, Zhang HH, Cao HF, et al. Fluorescence polymerase chain reaction detection of <I>Vibrio parahaemolyticus</I> TDH and TLH [J]. <I>Laboratory  Medicine,</I> 2007,22(4):450-454. (in Chinese)
      陈丽,张红河,曹海芬.荧光聚合酶链反应检测副溶血弧菌TLH与TDH[J]. 检验医学,2007,22(4):450-454.
      [9]Kuang YY, Li SG, Luo YP. Loop-mediated isothermal amplification method for detection of nucleic acids and its application[J]. <I>Microbiology,</I>2007,34(3):557-560. (in Chinese)
      匡燕云,李思光,罗玉萍. 环介导等温扩增核酸技术及其应用[J].微生物学通报,2007,34(3):557-560.
      [10]Hou XL, Cao QY, Pan JC, et al. Classification and identification of <I>Vibrio cholerae</I> and <I>Vibrio parahaemolyticus</I> isolates based on <I>gyrB</I> gene phylogenetic analysis[J].<I> Acta Microbiologica Sinica,</I>2006, 46(6):884-889. (in Chinese) 侯晓丽,曹清毅,潘劲草,等.霍乱弧菌和副溶血弧菌分离株的<I>gyrB</I> 基因系统发育分析[J].微生物学报,2006,46(6):884-889.
      [11]Xu Q, Sun XH, Zhao Y, et al. Development of Loop-mediated isotherma amplification ( LAMP )method for detection of <I>Vibrio parahaemolyticus</I>[J]. <I>Journal of China Biotechnology,</I>2007,27 (12):66-72. (in Chinese)   徐芊,孙晓红,赵勇,等. 副溶血弧菌 LAMP检测方法的建立[J]. 中国生物工程杂志,2007,27(12):66-72.


    1. [1]

      韩艳青侯凤伶张淑红申玉学史红关文英申志新 . 基于多重PCR的副溶血弧菌大流行菌群及其毒力基因检测方法的建立与评价. 疾病监测, 2016, 31(9): 750-754. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.09.010

    2. [2]

      李路茜李振军楼永良 . GyrB基因在诺卡菌菌种鉴定中的应用研究. 疾病监测, 2016, 31(6): 503-506. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.014

    3. [3]

      沈丽珍张爱鸣陈素菜李少禧周铁丽夏菲 . 急性肠炎患者副溶血弧菌的流行病学与耐药性分析. 疾病监测, 2014, 29(1): 56-57. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.01.015

    4. [4]

      张颖华陈秀华刘芸童锐王小光 . 2014-2017年上海市闵行区副溶血弧菌的耐药性分析及预测. 疾病监测, 2018, 33(5): 376-380. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.05.007

    5. [5]

      . 副溶血弧菌在乳鼠肠道内竞争性定殖实验方法的建立及应用. 疾病监测, 2015, 30(12): 1050-1055. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.12.015

    6. [6]

      赵林陈美玲卢昕李杰赵宏群阚飙逄波 . 中国副溶血弧菌多位点可变数目串联重复序列分型方法的建立. 疾病监测, 2019, 34(6): 495-500. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.06.006

    7. [7]

      梁均和李柏生刘涛华潘钊文黄妙琳赵劲文 . 广东省江门市一起副溶血弧菌食物中毒分离株的病原学特征分析. 疾病监测, 2018, 33(5): 387-390. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.05.009

    8. [8]

      李颖张晴张爽张彦春荆红波马红梅逄波 . 北京市顺义区三起关联性副溶血弧菌食源性疾病暴发事件的识别与分析. 疾病监测, 2019, 34(4): 371-376. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.04.019

    9. [9]

      陈美玲逄波 . 副溶血弧菌耐药现状及耐药机制. 疾病监测, 2018, 33(5): 370-375. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.05.006

    10. [10]

      赵宏群刁保卫杜小莉卢昕崔志刚阚飙逄波 . 副溶血弧菌分子分型数据库建立与分析. 疾病监测, 2016, 31(11): 920-924. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.11.008

    11. [11]

      陈秀英梅建华陈沙彬柳付明叶夏良 . 2014-2018年浙江省丽水市副溶血弧菌流行情况及菌株特征分析. 疾病监测, 2019, 34(9): 822-826. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.09.011

    12. [12]

      张爽李颖张彦春马红梅王园园张赫 . 2015-2017年北京市顺义区腹泻病例副溶血弧菌流行特征与分子分型特征分析. 疾病监测, 2018, 33(5): 381-386. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.05.008

    13. [13]

      陈美玲卢昕赵林李杰阚飙逄波 . 我国东南沿海地区副溶血弧菌O3:K6血清型耐药分析. 疾病监测, 2018, 33(5): 365-369. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.05.005

    14. [14]

      章红红朱林英潘丽峰陈洪友苏靖华傅慧琴黄红孙乔傅益飞王闻卿黎健连伟刚杨玲凤 . 上海市浦东新区副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征分析. 疾病监测, 2013, 28(2): 88-95. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.2.003

    15. [15]

      黄世旺徐昌平方叶珍李剑赵雪琴李琳 . 两种核酸检测法在副溶血性弧菌耐热直接溶血素和不耐热溶血毒素中的应用评估. 疾病监测, 2016, 31(9): 746-749. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.09.009

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  • 收稿日期:  2009-05-08
  • 刊出日期:  2009-08-30
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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