多重实时荧光PCR快速检测沙门菌和单增李斯特菌

吴晓芳 韩建康 纪蕾 徐德顺 陈莉萍 沈月华 查赟峰

引用本文: 吴晓芳, 韩建康, 纪蕾, 徐德顺, 陈莉萍, 沈月华, 查赟峰. 多重实时荧光PCR快速检测沙门菌和单增李斯特菌[J]. 疾病监测, 2011, 26(3): 234-237. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.03.022 shu
Citation:  WU Xiao-fang, HAN Jian-kang, JI Lei, XU De-shun, CHEN Li-ping, SHEN Yue-hua and CHA Yun-feng. Rapid simultaneous detections of Salmonella and Listeria monocytogenes by multiplex real-time PCR[J]. Disease Surveillance, 2011, 26(3): 234-237. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.03.022 shu

多重实时荧光PCR快速检测沙门菌和单增李斯特菌

    作者简介: 吴晓芳,女,浙江省湖州市人,主要从事微生物检验工作;
    通信作者: 吴晓芳, xf980718@126.com
摘要: 目的 建立可同时检测沙门菌、单增李斯特菌的双重实时荧光PCR快速检测方法,并应用于食品样品的检测。 方法 根据GenBank上下载的沙门菌invA基因、单增李斯特菌hlyA基因的保守区序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立并优化双重实时荧光PCR反应体系。对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行评估,并应用于食品标本的检测。 结果 实验结果表明,该检测方法特异性强,对大肠埃希菌、志贺菌、副溶血性弧菌等其他病原菌进行检测均未产生交叉反应。对沙门菌和单增李斯特菌纯培养物的最低检出限分别可达10 cfu/ml和100 cfu/ml;并且重复性好,变异系数均小于5%;对80份食品标本同时采用本文建立的双重荧光PCR方法和单重荧光PCR方法以及传统的分离培养方法进行检测,结果显示本文建立的双重荧光PCR方法对两种病原菌的检测效果明显优于单重荧光PCR方法以及传统的分离培养法,整个检测过程可在10 h内完成,包括前增菌所用的6 h。 结论 本研究建立的多重实时荧光PCR方法能同时对沙门菌和单增李斯特菌进行快速检测,并且灵敏度高、特异性好,可为食源性疾病的病原学快速检测提供新的手段。

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  • 通信作者:  吴晓芳, xf980718@126.com
  • 收稿日期:  2010-08-04
  • 刊出日期:  2011-03-25
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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