利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌

樊粉霞 娄静 陈建才 聂艳妮 阚飙 闫梅英

引用本文: 樊粉霞, 娄静, 陈建才, 聂艳妮, 阚飙, 闫梅英. 利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌[J]. 疾病监测, 2012, 27(6): 471-474. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.6.016 shu
Citation:  FAN Fen-xia, LOU Jing, CHEN Jian-cai, NIE Yan-ni, KAN Biao and YAN Mei-ying. Detection of Salmonella Typhi in blood with real time fluorescent quantitative reverse transcriptive polymerase chain reaction[J]. Disease Surveillance, 2012, 27(6): 471-474. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.6.016 shu

利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌

摘要: 目的 建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, rRT-PCR)方法检测伤寒沙门菌。 方法 针对伤寒沙门菌STY1631基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用51个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌核糖核酸(RNA)评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。 结果 利用该方法检测48株伤寒沙门菌均阳性,其余33种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性。在对纯菌总RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限为1 pg/反应,即194个拷贝/反应。以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1102 cfu/ml。 结论 建立了敏感性高、特异性好的rRT-PCR检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗。

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  • 收稿日期:  2012-03-16
  • 刊出日期:  2012-06-20
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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