利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用

关红 秦天 周海建 任红宇 段永翔 许欣 邵祝军

引用本文: 关红, 秦天, 周海建, 任红宇, 段永翔, 许欣, 邵祝军. 利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用[J]. 疾病监测, 2013, 28(1): 57-60. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.018 shu
Citation:  GUAN Hong, QIN Tian, ZHOU Hai-jian, REN Hong-yu, DUAN Yong-xiang, XU Xin and SHAO Zhu-jun. Establishment and application of pulsed-field gel electrophoresis assay to screen plasmid from bacteria[J]. Disease Surveillance, 2013, 28(1): 57-60. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.018 shu

利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用

摘要: 目的 改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。 方法 使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。 结果 去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。 结论 该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。

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  • 收稿日期:  2012-09-28
  • 刊出日期:  2013-01-20
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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