模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法

许华青 王艳 王毅 代航 王和 叶长芸

许华青, 王艳, 王毅, 代航, 王和, 叶长芸. 模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法[J]. 疾病监测, 2014, 29(3): 228-233. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.016
引用本文: 许华青, 王艳, 王毅, 代航, 王和, 叶长芸. 模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法[J]. 疾病监测, 2014, 29(3): 228-233. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.016
XU Hua-qing, WANG Yan, WANG Yi, DAI Hang, WANG He, YE Chang-yun. Novel multiplex real-time TaqMan PCR assay for detection of Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii in simulated fecal samples[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(3): 228-233. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.016
Citation: XU Hua-qing, WANG Yan, WANG Yi, DAI Hang, WANG He, YE Chang-yun. Novel multiplex real-time TaqMan PCR assay for detection of Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii in simulated fecal samples[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(3): 228-233. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.016

模拟粪便标本单增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应检测方法

doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.016
基金项目: 

国家科技重大传染病防治专项(No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-101)

Novel multiplex real-time TaqMan PCR assay for detection of Listeria monocytogenes and Listeria ivanovii in simulated fecal samples

Funds: 

This study was supported by the National Science and Technology Key Project for the Prevention and Control of HIV/AIDS, Viral Hepatitis and Other Communicable Diseases (No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-101)

  • 摘要: 目的 建立一种TaqMan双重实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR),用于模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的快速检测。方法 以单增李斯特菌特异基因hly和伊氏李斯特菌特异基因smcL作为靶基因,合成2对引物和其相应的荧光探针,制作标准曲线,建立从模拟粪便标本中直接检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的TaqMan 双重real-time PCR。利用李斯特菌属中其他种李斯特菌及常见致病菌验证引物、探针的特异性;通过制备模拟粪便标本并对其进行二次增菌后,分别提取DNA,采用TaqMan双重real-time PCR进行检测,以达到快速检测单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的目的。结果 采用本研究建立的TaqMan双重real-time PCR对模拟粪便标本的检测结果显示特异性良好,与其他种李斯特菌和其他病原菌均无交叉反应。模拟粪便标本中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的检测下限分别为2.45103 cfu/g和 2.92103 cfu/g;模拟粪便标本在3 h内可得出检测结果,当模拟粪便标本中单增李斯特菌含量为6 cfu/g和伊氏李斯特菌含量为5 cfu/g时,经过增菌后使用双重real-time PCR可检测出阳性结果。结论 本研究建立了以单增李斯特菌的特异基因hly和伊氏李斯特菌的特异基因smcL为靶基因的TaqMan双重real-time PCR检测方法,该方法具有特异性好、敏感性高、快速易操作等优点,可用于临床、食品及环境标本的快速诊断,以及我国人群中单增李斯特菌和伊氏李斯特菌的携带或感染状况的调查分析。
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出版历程
  • 收稿日期:  2013-11-14
  • 刊出日期:  2014-03-20

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