利用双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术鉴别诊断粪便标本中的伤寒和甲型副伤寒沙门菌

李杰 肖燕 樊粉霞 阚飙 闫梅英

李杰, 肖燕, 樊粉霞, 阚飙, 闫梅英. 利用双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术鉴别诊断粪便标本中的伤寒和甲型副伤寒沙门菌[J]. 疾病监测, 2014, 29(4): 310-315. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.04.015
引用本文: 李杰, 肖燕, 樊粉霞, 阚飙, 闫梅英. 利用双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术鉴别诊断粪便标本中的伤寒和甲型副伤寒沙门菌[J]. 疾病监测, 2014, 29(4): 310-315. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.04.015
LI Jie, XIAO Yan, FAN Fen-xia, KAN Biao, YAN Mei-ying. Establishment of dual TaqMan fluorescent quantitative polymerase chain reaction to detect and differentiate Salmonella typhi and Salmonella paratyphi A in stool samples[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(4): 310-315. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.04.015
Citation: LI Jie, XIAO Yan, FAN Fen-xia, KAN Biao, YAN Mei-ying. Establishment of dual TaqMan fluorescent quantitative polymerase chain reaction to detect and differentiate Salmonella typhi and Salmonella paratyphi A in stool samples[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(4): 310-315. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.04.015

利用双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应技术鉴别诊断粪便标本中的伤寒和甲型副伤寒沙门菌

doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.04.015
基金项目: 

国家十二五科技重大专项课题(No.2013ZX10004216)

Establishment of dual TaqMan fluorescent quantitative polymerase chain reaction to detect and differentiate Salmonella typhi and Salmonella paratyphi A in stool samples

Funds: 

This work was supported by the National Science and Technology Key Project in China's 12th 5 Year Plan: Development of High Throughout Molecular Discrimination Technology to Replace Bacteria Serological Detection (No.2013ZX10004216)

  • 摘要: 目的 建立针对粪便标本中伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的检测方法,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高感染人群粪便标本中两种病原的检出效率。方法 分别根据伤寒沙门菌特异基因STY1633及甲型副伤寒沙门菌特异基因SPA4289设计特异性引物及探针,优化反应条件,建立双重TaqMan荧光定量聚合酶链反应(dual taqman fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)体系。利用44株伤寒沙门菌、30株甲型副伤寒沙门菌、88株其他血清型沙门菌染色体DNA及引起发热的其他病原菌,评价该方法的特异性和灵敏性,并对伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌的粪便模拟标本进行检测下限评价,同时利用10份伤寒患者、20份甲型副伤寒患者及48份其他病原所致发热和/或伴腹泻的患者粪便标本进行特异性、敏感性验证。结果 利用本方法检测的伤寒、副伤寒沙门菌纯菌及伤寒、甲型副伤寒患者标本扩增阳性,其余的非伤寒沙门菌、致腹泻的其他5种肠道致病菌及引起发热症状的8种常见非肠道病原菌纯菌及相应患者标本均扩增阴性。在对纯伤寒沙门菌DNA及甲型副伤寒沙门菌DNA检测中,双重TaqMan荧光定量PCR法的最低检测限分别为1 pg/反应(194拷贝/反应)及2.5 pg/反应(485拷贝/反应)。以粪便模拟样品提取DNA为模板的检测中,增菌前伤寒沙门菌检测下限达102 cfu/g,增菌后可达1 cfu/g;增菌前甲型副伤寒沙门菌检测下限达104 cfu/g,增菌后可达10 cfu/g。结论 本研究建立了特异性好、灵敏度高的检测粪便中伤寒沙门菌及甲型副伤寒沙门菌的双重TaqMan荧光定量PCR方法,为伤寒及甲型副伤寒疾病的同时快速诊断及鉴别诊断、某些不明原因发热及腹泻症状的病原的初步鉴定提供了简易手段。
  • [1] SunJL,ZhangJ,MaHL,etal.Epidemiologicalfeaturesoftyphoid/paratyphoidfeverinprovinceswithhighincidencerateandinthewholecountry,in2012[J].ChinJEpidemiol,2013,34(12):1183-1188.(inChinese)孙军玲,张静,马会来,等.2012年全国和高发省份伤寒、副伤寒流行特征分析[J].中华流行病学杂志,2013,34(12):1183-1188.
    [2] CrumpJA,LubySP,MintzED.Theglobalburdenoftyphoidfever[J].BullWHO,2004,82:346-354.
    [3] GraceYN,LiMN,RaymondL,etal.DevelopmentofanovelmultiplexPCRforthedetectionanddifferentiationofSalmonellaentericaserovarsTyphiandparatyphiA[J].ResMicrobiol,2010,161(4):243-248.
    [4] TranN,AbhilashaK,sabinaD,etal.Thesensitivityofreal-timePCRamplificationtargetinginvasiveSalmonellaserovarsinbiologicalspecimens[J].BMCInfectDis,2010,10(5):125-133.
    [5] MassiMN,ShirakawaT,GotohA,etal.QuantitativedetectionofSalmonellaentericaserovarTyphifrombloodofsuspectedtyphoidfeverpatientsbyreal-timePCR[J].IntJMedMicrobiol,2005,295(2):117-120.
    [6] FanFX,LouJ,ChenJC,etal.DetectionofSalmonellatyphiinbloodwithrealtimefluorescentquantitativereversetranscriptivepolymerasechainreaction[J].DiseaseSurveilance,2012,27(6):471-474.(inChinese)樊粉霞,娄静,陈建才,等.利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌[J].疾病监测,2012,27(6):471-474.
    [7] FanFX,WangSJ,LouJ,etal.EstablishmentofRT-LAMPtechniquetodetectSalmonellatyphipathogeninblood[J].DiseaseSurveilance,2012,27(4):325-329.(inChinese)樊粉霞,王淑京,娄静,等.全血中伤寒沙门菌RT-LAMP检测方法的建立[J].疾病监测,2012,27(4):325-329.
    [8] XiaoY,RenZH,FanFX,etal.DetectionfoSalmonellatyphiinstoolsampleswithreal-timefluorescentquantitativepolymerasechainreaction[J].DiseaseSurveillance,2013,28(5):407-411.(inChinese)肖燕,任志鸿,樊粉霞,等.利用实时荧光定量PCR法检测粪便标本中的伤寒沙门菌[J].疾病监测,2013,28(5):407-411.
  • 加载中
计量
  • 文章访问数:  1616
  • HTML全文浏览量:  40
  • PDF下载量:  196
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2014-02-10
  • 刊出日期:  2014-04-20

目录

    /

    返回文章
    返回

    在线交流

    防诈骗公告

    近期有不法分子以本刊编辑身份添加作者微信,请务必提高警惕!本刊关于稿件的一切事项通知均采用编辑部唯一邮箱(jbjc@icdc.cn)和座机(010-58900732)联系作者,且在录用稿件后仅收取版面费,无其他任何名目费用(如审稿费和加急费等),非编辑部邮箱发送的本刊收费用通知等均为诈骗,不要随意汇入款项!如有可疑及时致电编辑部核实确认!