结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价

夏远志 王雪枝 刘海灿 李马超 赵秀芹 楼永良 吕建新 万康林

引用本文: 夏远志, 王雪枝, 刘海灿, 李马超, 赵秀芹, 楼永良, 吕建新, 万康林. 结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价[J]. 疾病监测, 2016, 31(4): 272-277. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.04.004 shu
Citation:  XIA Yuan-zhi, WANG Xue-zhi, LIU Hai-can, LI Ma-chao, ZHAO Xiu-qin, LOU Yong-liang, LYU Jian-xin and WANG Kang-lin. Cloning expression of antigens Rv2654c, Rv1985c and Rv3868 of Mycobacterium tuberculosis and value in serological diagnosis of tuberculosis[J]. Disease Surveillance, 2016, 31(4): 272-277. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.04.004 shu

结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价

摘要: 目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景。方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列, 并与表达载体pET-32a构建重组质粒。原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白, 利用亲和层析的方法进行纯化。采用棋盘滴定的方法, 确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)最佳反应条件, 并应用190份血清进行血清IgG抗体检测, 结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价。通过ROC计算各抗原组合的诊断效能, 确定最佳组合方案。结果 成功构建了重组蛋白, 对重组后的片段进行测序, 经BLAST比对与目的基因完全一致, 且能够稳定表达。对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测, 经统计学分析, Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16%、56.84%和71.05%。结合ROC得到最佳的抗原组合方案为Rv2654c+Rv3868, 其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95%、72.63%和75.79%。结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力, 可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白。抗原组合Rv2654c+Rv3868具有较高的诊断效能, 有较好的潜在应用价值。

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  • 收稿日期:  2015-12-28
  • 刊出日期:  2016-04-20
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
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    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

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