不同方法提取血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌核酸的比较

杨晓雯 刘佳音 张宇 范玉 田国忠 赵鸿雁 朴东日 姜海

杨晓雯, 刘佳音, 张宇, 范玉, 田国忠, 赵鸿雁, 朴东日, 姜海. 不同方法提取血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌核酸的比较[J]. 疾病监测, 2022, 37(7): 964-966. doi: 10.3784/jbjc.202112210654
引用本文: 杨晓雯, 刘佳音, 张宇, 范玉, 田国忠, 赵鸿雁, 朴东日, 姜海. 不同方法提取血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌核酸的比较[J]. 疾病监测, 2022, 37(7): 964-966. doi: 10.3784/jbjc.202112210654
Yang Xiaowen, Liu Jiayin, Zhang Yu, Fan Yu, Tian Guozhong, Zhao Hongyan, Piao Dongri, Jiang Hai. Comparison of different methods for extracting Brucella DNA from anticoagulant cultured in blood culture bottle[J]. Disease Surveillance, 2022, 37(7): 964-966. doi: 10.3784/jbjc.202112210654
Citation: Yang Xiaowen, Liu Jiayin, Zhang Yu, Fan Yu, Tian Guozhong, Zhao Hongyan, Piao Dongri, Jiang Hai. Comparison of different methods for extracting Brucella DNA from anticoagulant cultured in blood culture bottle[J]. Disease Surveillance, 2022, 37(7): 964-966. doi: 10.3784/jbjc.202112210654

不同方法提取血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌核酸的比较

doi: 10.3784/jbjc.202112210654
基金项目: 国家自然科学基金(No. 81902105);传染病预防控制国家重点实验室青年科学基金(No. 2021SKLID508);布鲁氏菌免疫富集及多重PCR检测技术(No. KFYJ-2021053);侯云德院士科研青年基金(No. 2019HYDQNJJ08)
详细信息
    作者简介:

    杨晓雯,女,山东省潍坊市人,博士,副研究员,主要从事布鲁氏菌防控及致病机制研究,Email:yangxiaowen@icdc.cn

    通讯作者:

    姜海,Tel: 010–58900767,Email: jianghai@icdc.cn

  • 中图分类号: R211; R516.7

Comparison of different methods for extracting Brucella DNA from anticoagulant cultured in blood culture bottle

Funds: This study was supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 81902105), Grant from the State Key Laboratory of Infectious Disease Prevention and Control (No. 2021SKLID508), Immuno-enrichment and Multiplex PCR Detection of Brucella (No. KFYJ-2021053) and Young Scientists Research Found of Academician Yunde Hou (No. 2019HYDQNJJ08)
More Information
  • 摘要:   目的   比较不同提取方法对血培养瓶培养的抗凝血中布鲁氏菌检出率的影响。  方法   将定量检测的灭活菌液/基因组DNA梯度添加至含抗凝血的血培养瓶中,选择不同的方法提取核酸,利用荧光定量检测其含量。  结果   磁珠法和裂解法最低能检测添加102 CFU/mL的灭活菌液以及10−3 ng/μL的基因组DNA;离心柱法无法检测未经红细胞裂解液处理的添加106 CFU/mL的灭活菌液以及10 ng/μL的基因组DNA,经红细胞裂解液处理后也只能检测到添加104 CFU/mL的灭活菌液以及1 ng/μL的基因组DNA的模拟样品。  结论  红细胞裂解液处理模拟样品能够增加核酸的提取量,裂解法提取效果最好,其次是磁珠法,再次是离心柱法。 本研究为疑似布鲁氏菌病样品血培养物的核酸检测提供了方法参考,为提高布鲁氏菌病的诊断率提供了新的思路。
  • 表  1  不同方法提取血培养物核酸的比较

    Table  1.   Comparison of different methods for nucleic acid extraction form blood culture

    培养瓶种类磁珠法离心柱法裂解法
    灭活菌液基因组DNA灭活菌液基因组DNA灭活菌液基因组DNA
    最低
    检测量
    (CFU/mL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    最低
    检测量
    (ng/μL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    最低
    检测量
    (CFU/mL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    最低
    检测量
    (ng/μL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    最低
    检测量
    (CFU/mL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    最低
    检测量
    (ng/μL)
    Ct
    ($\bar x $±s
    血培养瓶A
     处理组10237.26±
    0.12
    10−337.02±
    0.11
    10236.85±
    0.11
    10−336.65±
    0.13
     未处理组10237.34±
    0.11
    10−337.15±
    0.11
    10237.14±
    0.11
    10−336.80±
    0.09
    血培养瓶B
     处理组10236.85±
    0.10
    10−337.18±
    0.07
    10437.77±
    0.05
    137.54±
    0.11
    10236.73±
    0.11
    10−336.64±
    0.12
     未处理组10237.05±
    0.80
    10−337.36±
    0.16
    10236.75±
    0.11
    10−337.06±
    0.09
    注:−. 样品中添加106 CFU/mL的灭活菌液或10 ng/μL的基因组DNA利用荧光定量检测无Ct
    下载: 导出CSV
  • [1] Alton GG, Jones LM, Pietz DE. Laboratory techniques in brucellosis[J]. Monogr Ser World Health Organ, 1967(55): 1–163.
    [2] 刘洪波, 刘晓雷, 罗小铭. 核酸提取方法进展[J]. 现代生物医学进展,2011,11(16):3187–3190. DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2011.16.001.

    Liu HB, Liu XL, Luo XM. Developments of nucleic acid extraction method[J]. Progr Mod Biomed, 2011, 11(16): 3187–3190. DOI:  10.13241/j.cnki.pmb.2011.16.001.
    [3] Yang XW, Wu TL, Liu WX, et al. Cell membrane components of Brucella melitensis play important roles in the resistance of low-level rifampicin[J]. PLoS Negl Trop Dis, 2020, 14(12): e0008888. DOI:  10.1371/JOURNAL.PNTD.0008888.
    [4] Probert WS, Schrader KN, Khuong NY, et al. Real-time multiplex PCR assay for detection of Brucella spp., B. abortus, and B. melitensis[J]. J Clin Microbiol, 2004, 42(3): 1290–1293. DOI: 10.1128/JCM.42.3.1290−1293.2004.
    [5] 刘志国. 实时多重荧光PCR快速鉴别布鲁菌方法的建立[D]. 呼和浩特: 内蒙古农业大学, 2010.

    Liu ZG. Establishment of real-time multiplex fluorescence PCR for rapid identification of Brucella[D]. Hohhot: Inner Mongolia Agricultural University, 2010.
    [6] 康蓓佩, 付晓蕊, 杨佩红, 等. 血培养分离出布鲁氏菌的临床特征研究[J]. 现代医药卫生,2021,37(7):1185–1188. DOI:10.3969/j.issn.1009−5519.2021.07.033.

    Kang BP, Fu XR, Yang PH, et al. Clinical characteristics of Brucella isolated from blood culture[J]. J Mod Med Health, 2021, 37(7): 1185–1188. DOI: 10.3969/j.issn.1009−5519.2021.07.033.
    [7] Bounaadja L, Albert D, Chénais B, et al. Real-time PCR for identification of Brucella spp.: a comparative study of IS711, bcsp31 and per target genes[J]. Vet Microbiol, 2009, 137(1/2): 156–164. DOI:  10.1016/j.vetmic.2008.12.023.
  • 加载中
计量
  • 文章访问数:  317
  • HTML全文浏览量:  36
  • PDF下载量:  22
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2021-12-21
  • 网络出版日期:  2022-05-28
  • 刊出日期:  2022-08-11

目录

    /

    返回文章
    返回

    在线交流

    防诈骗公告

    近期有不法分子以本刊编辑身份添加作者微信,请务必提高警惕!本刊关于稿件的一切事项通知均采用编辑部唯一邮箱(jbjc@icdc.cn)和座机(010-58900732)联系作者,且在录用稿件后仅收取版面费,无其他任何名目费用(如审稿费和加急费等),非编辑部邮箱发送的本刊收费用通知等均为诈骗,不要随意汇入款项!如有可疑及时致电编辑部核实确认!