应用多位点串联重复序列分析方法鉴定布鲁氏菌变异株

田国忠 姜海 赵鸿雁 杨晓雯 朴东日

引用本文: 田国忠, 姜海, 赵鸿雁, 杨晓雯, 朴东日. 应用多位点串联重复序列分析方法鉴定布鲁氏菌变异株[J]. 疾病监测. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.07.020 shu
Citation:  Guozhong Tian, Hai Jiang, Hongyan Zhao, Xiaowen Yang and Dongri Piao. Identification of Brucella mutants by MLVA assay[J]. Disease Surveillance. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.07.020 shu

应用多位点串联重复序列分析方法鉴定布鲁氏菌变异株

    作者简介: 田国忠,男,北京市人,硕士研究生,从事布鲁氏菌病原生物学研究工作,Email: tianguozhong@icdc.cn;
    通信作者: 朴东日, piaodongri@icdc.cn
  • 基金项目: 国家科技重大专项(No.2018ZX10712-001)

摘要: 目的 对常规的生物学鉴定方法无法准确分类的布鲁氏菌变异菌,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)方法进行种型分类。 方法 39株经常规生物学方法鉴定为布鲁氏菌变异株,应用MLVA方法进行种型分类。 结果 39株菌株与粗糙型血清R凝集,可被Bk2噬菌体裂解,Wb、Tb噬菌体不裂解,其生物型别不确定;9株菌株与血清A和M弱凝集,2株菌株与血清M弱凝集,其他28株菌株与血清A和M都不凝集;33株菌株可被粗糙型Iz噬菌体裂解,确定39株菌株为布鲁氏菌变异株。 应用16个位点串联重复序列分析,结合布鲁氏菌参考标准菌株,经聚类分析,39株菌中2株菌与牛种布鲁氏菌生物2和4型高度相似,37菌株与羊种布鲁氏菌生物3型高度相似。 结论 常规生物学鉴定方法与分子生物学分型方法的联合运用,可以更好地解决布鲁氏菌分离菌株的分类,尤其是适合布鲁氏菌变异菌株的鉴定。

English

    1. [1]

      姜顺求. 布鲁氏菌病防治手册[M]. 北京: 人民卫生出版社, 1986: 63-70.
      Jiang SQ. Handbook of Brucellosis control[M]. Beijing: People′s Medical Publishing House, 1986: 63-70.

    2. [2]

      Olsen SC, Palmer MV. Advancement of knowledge of Brucella over the past 50 years[J]. Vet Pathol, 2014,51(6):1076–1089. DOI:10.1177/0300985814540545.

    3. [3]

      姜继春, 李占乔, 李绍丰, 等. 一个特殊布病疫点布氏菌自然消长规律的研究[J]. 中国地方病防治杂志,1994,9(3):179–182.
      Jiang JC, Li ZQ, Li SF, et al. Study on the natural growth and decline of Brucella in a special Brucellosis focus[J]. Chin J Ctrl Endem Dis, 1994,9(3):179–182.

    4. [4]

      郭秉兰. 关于布鲁氏菌的L型(综述)[J]. 地方病通报,1994,9(1):96–98.
      Guo BL. Types L of Brucella(review)[J]. Endem Dis Bull, 1994,9(1):96–98.

    5. [5]

      李元凯, 邱海燕, 马烨, 等. 布鲁氏菌非典型菌株及R型菌株生物学特性和产生原因的探讨[J]. 中国人兽共患病杂志,1996,12(5):22–25.
      Li YK, Qiu HY, Ma Y, et al. Research on biological characteristics and production mechanism of the atypical-strain and R-strain of Brucellaceae[J]. Chin J Zoonoses, 1996,12(5):22–25.

    6. [6]

      白永飞, 帖萍, 郑玉华, 等. 1950-2018年山西省布鲁氏菌病病原学特征分析[J]. 疾病监测,2019,34(12):1068–1071. DOI:10.3784/j.issn.1003−9961.2019.12.008.
      Bai YF, Tie P, Zheng YH, et al. Etiological characteristics of Brucella strains isolated in Shanxi, 1950–2018[J]. Dis Surveill, 2019,34(12):1068–1071. DOI:10.3784/j.issn.1003−9961.2019.12.008.

    7. [7]

      郝宗宇, 张爱梅. 河南省布氏菌病病原学研究进展[J]. 河南医学研究,1994,3(1):84–86.
      Hao ZY, Zhang AM. Research advances of Brucellosis in Henan province[J]. Henan Med Res, 1994,3(1):84–86.

    8. [8]

      宋利桃, 张庆华. 内蒙古近10年检出238株布氏菌分析[J]. 中国地方病防治杂志,2008,23(2):139–140. DOI:10.3969/j.issn.1001−1889.2008.02.023.
      Song LT, Zhang QH. Analysis of 238 Brucella detected in Inner Mogolia in latest 10 years[J]. Chin J Control Endem Dis, 2008,23(2):139–140. DOI:10.3969/j.issn.1001−1889.2008.02.023.

    9. [9]

      国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2010.
      State Pharmacopoeia Commission. Harmacopoeia of the People's Republic of China[M]. Beijing: Chinese Medical Science and Technology Press, 2010.

    10. [10]

      国家卫生健康委员会. WS 269-2019 布鲁氏菌病诊断[S]. 北京: 中国标准出版社, 2019.
      National Health Commission. WS 269-2019 Diagnosis for Brucellosis[S]. Beijing: China Standards Press, 2019.

    11. [11]

      Bricker BJ, Halling SM. Differentiation of Brucella abortus bv. 1, 2, and 4, Brucella melitensis, Brucella ovis, and Brucella suis bv. 1 by PCR[J]. J Clin Microbiol, 1994,32(11):2660–2666. DOI:10.1128/JCM.32.11.2660−2666.1994.

    12. [12]

      Li ZJ, Cui BY, Chen H, et al. Molecular typing of Brucella suis collected from 1960s to 2010s in China by MLVA and PFGE[J]. Biomed Environ Sci, 2013,26(6):504–508. DOI:10.3967/0895−3988.2013.06.013.

    13. [13]

      Le Flèche P, Jacques I, Grayon M, et al. Evaluation and selection of tandem repeat loci for a Brucella MLVA typing assay[J]. BMC Microbiol, 2006,6:9. DOI:10.1186/1471−2180−6−9.

    14. [14]

      DelVecchio VG, Kapatral V, Redkar RJ, et al. The genome sequence of the facultative intracellular pathogen Brucella melitensis[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2002,99(1):443–448. DOI:10.1073/pnas.221575398.

    15. [15]

      Wareth G, Melzer F, Neubauer H. In Brucella: selective pressure may turn some genes on instead of default off position[J]. Med Hypoth, 2017,103:29–31. DOI:10.1016/j.mehy.2017.04.006.

    16. [16]

      Soler-Lloréns PF, Quance CR, Lawhon SD, et al. A Brucella spp. isolate from a Pac-Man frog (Ceratophrys ornata) reveals characteristics departing from classical Brucellae[J]. Front Cell Infect Microbiol, 2016,6:116. DOI:10.3389/fcimb.2016.00116.

    1. [1]

      白晓晨曾慧慧韩冰窦唱孙华丽宋美华王爱彬钱芳段毓娇徐艳利宋蕊陈志海蒋荣猛 . 不同年龄段人群布鲁氏菌病急性期临床特征分析. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.09.009

    2. [2]

      白永飞帖萍郑玉华闫昌福王婷王晶莹李学敏杨红霞崔步云 . 1950-2018年山西省布鲁氏菌病病原学特征分析. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.12.008

    3. [3]

      杨杰赵素莲崔步云姜海赵鸿雁朴冬日 . 多位点可变数目串联重复序列分型方法检测布鲁氏菌分型标准化操作方法的建立和应用. 疾病监测,

    4. [4]

      李博姜海崔步云黎唯刘志国尚修建 . 新疆维吾尔自治区人间布鲁氏菌多位点可变数目串联重复序列分型研究. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.05.011

    5. [5]

      刁保卫聂艳妮李杰娄静阚飙闫梅英 . 多位点串联重复序列分析应用于中国肠炎沙门菌分型能力的评价. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.12.017

    6. [6]

      苏云开余琴吕冰马岩连璐璐杨晓敏董海燕刘耀赵秀芹吴移谋万康林 . 内蒙古地区结核分枝杆菌串联重复序列基因多态性分析. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.4.004

    7. [7]

      廖虹瑜曾林子祁腾罗隆泽 . 2014年四川省实验室检测布鲁氏菌病理分析. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.10.013

    8. [8]

      王娜呼和巴特尔崔步云 . 布鲁氏菌免疫相关抗原研究进展. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.02.019

    9. [9]

      . 新疆生产建设兵团第十三师重点人群布鲁氏菌感染水平调查. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2018.03.012

    10. [10]

      牛桓彩田国忠 . 中国布鲁氏菌耐药机制与药物敏感性研究现状. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.07.021

    11. [11]

      田国忠朴东日赵鸿雁路殿英姜海王立军 . 实时荧光定量PCR检测布鲁氏菌核酸DNA的应用评价. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2019.05.017

    12. [12]

      田国忠 . 巢式聚合酶链式反应检测布鲁氏菌核酸DNA方法的建立. 疾病监测, DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2020.03.015

  • 图 1  AMOS-PCR鉴定39株临床分离菌株电泳图谱

    Figure 1.  Gel electrophoresis of 39 clinical Brucella strains by AMOS-PCR

    图 2  39株临床分离菌株和参考标准菌株聚类分析

    Figure 2.  Cluster analysis for 39 clinical Brucella strains and reference strains

    表 1  39株布鲁氏菌变异菌株生物学鉴定与多位点串联重复序列分析方法分型结果

    Table 1.  Biological identification and MLVA results of 39 strains of Brucella variant

    菌株
    数量a
    生物学鉴定 多位点串联重复
    序列分析分型
    种型 生物型 CO2
    需要
    H2S
    产生
    硫堇 复红 血清
    A
    血清
    M
    粗糙型
    血清R
    噬菌体
    Bk2
    噬菌体
    Wb
    噬菌体
    Tb
    噬菌体
    Iz
    1 羊种、变异 不确定 + + ± ± ± + / 羊种生物3型
    2 羊种、变异 不确定 + + + + 羊种生物3型
    2 羊种、变异 不确定 + + ± + + + 羊种生物3型
    2 ? 不确定 + + + + + 牛种生物2或4型
    3 羊种、变异 不确定 + + + + / 羊种生物3型
    7 羊种、变异 不确定 + + ± ± + + + 羊种生物3型
    22 羊种、变异 不确定 + + + + + 羊种生物3型
      注:a. 具有共同生物学特征的菌株数量;?. 不确定其种型和生物型;+. 阳性;±. 弱阳性;−. 阴性;/. 该菌株未鉴定
    下载: 导出CSV
  • 2020-0067应用多位点串联重复序列分析方法鉴定布鲁氏菌变异株.docx

  • 加载中
图(2)表(1)
计量
  • PDF下载量:  3
  • 文章访问数:  1033
  • HTML全文浏览量:  352
  • 引证文献数: 0
文章相关
  • 通信作者:  朴东日, piaodongri@icdc.cn
  • 收稿日期:  2020-03-06
  • 网络出版日期:  2020-05-19
通信作者: 陈斌, bchen63@163.com
  • 1. 

    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

  1. 本站搜索
  2. 百度学术搜索
  3. 万方数据库搜索
  4. CNKI搜索

/

返回文章

在线交流