利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用
关红, 秦天, 周海建, 任红宇, 段永翔, 许欣, 邵祝军
2013,28(1) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.018
目的 改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。 方法 使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。 结果 去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。 结论 该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。
关键词: 质粒, 脉冲场凝胶电泳, 军团菌
金黄色葡萄球菌毒力基因检测及Spa分型研究
袁梦, 袁月明, 罗锦雁, 陈宏彬, 胡鹏威, 段永翔
2016,31(7) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.07.015
目的 研究深圳市南山区2009-2015年医院内患者临床检测标本、医院台面与医护人员双手涂抹样以及食物中毒样本中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)蛋白A基因多态性分型(single locus DNA-sequencing of the repeat region of the Staphylococcus protein A gene,Spa)的特征及毒力基因分布情况。方法 采用多重PCR方法检测SA的mecA与femA基因,PCR方法检测24个毒力基因以及SA蛋白A基因,PCR产物测序后序列上传数据库进行比对。结果 87株SA共检出48株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S. aureus,MRSA),检出率为55.2%。共检出21种毒力基因,检出率60%的毒力基因有LUKDE(65.5%)、SHE(67.8%)、mpHLG 2(85.1%)、HLD(93.1%)和 HLA(100.0%)。94.3%菌株携带5个以上毒力基因。三类样本中有11种毒力基因检出率差异有统计学意义,分别是SEB、mpSEC、mpSEJ、mpSEO、TST、HLB、HLD、mpHLG 1、mpHLG 2,mpETB和PVL。其中mpETB与PVL仅在患者中检出,肠毒素基因在食物中毒株中携带率较高。MRSA与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-sensitive S.aureus,MSSA)的3种毒力基因检出率差异有统计学意义,分别是mpETA、PVL及mpHLG 2;MRSA的毒力基因mpETA与PVL检出率明显高于MSSA(P=0.033, P=0.030),而mpHLG 2检出率明显低于MSSA(P=0.021)。87株SA分为24种Spa型,患者优势型别为t030(30.0%)与t437(36.7%),医院其他样本优势型别为t091(50.0%),食物中毒优势型别为t127(36.8%)与t091(21.1%)。结论 三类样本部分毒力基因检出差异有统计学意义。MRSA与MSSA携带毒力基因差异无统计学意义。三类样本中均存在优势的Spa型别。
关键词: 金黄色葡萄球菌, 耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌, 甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌, 毒力基因, 蛋白A基因多态性分型研究, 聚合酶链反应

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