574例结核病病例细菌学检验结果分析
张媛媛, 张选民, 王艳, 曾令城, 刘志广, 王西临, 赵秀芹, 韩跃玲, 杜新玲, 王春娟, 朱艳伶, 万康林
2006,21(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2006.6.299
目的了解西安市分支杆菌病原菌感染的流行状况,为制定结核病防治措施提供科学依据。方法采用流行病学抽样调查方法,选取陕西省西安市为调查点,于2005年5~8月对其13个区级结防所就诊的所有病人进行调查,每个病人收集三份痰标本。采用痰涂片和痰培养法检测病人痰标本,鉴别培养基培养法鉴定分支杆菌菌种。结果574位病人,涂片阳性113人,阳性率为19.69%,培养阳性病人150人,阳性率26.13%。后者明显高于前者,两者之间的差异具有显著统计学意义(!2=360.50,P<0.01),两者联合阳性率为26.83%。从137例病例痰标本中分离到251株分支杆菌菌株,结核分支杆菌、牛分支杆菌、非结核分支杆菌(NTM)和混合感染的比例分别是67.88%、5.84%、11.68%、14.60%。结论细菌培养法可明显提高阳性率;NTM感染流行状况应予以足够的重视。
关键词: 细菌学检验, 痰培养, 痰涂片, 菌种鉴定
新疆结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因型的初步研究
綦迎成, 刘洁, 鱼栓民, 李君莲, 赵秀芹, 王泉, 刘志广, 吕冰, 刘中华, 万康林
2010,25(12) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2010.12.007
目的 研究新疆结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型,初步了解其基因型多态性状况及主要流行株。 方法 在新疆维吾尔自治区胸科医院收集一个连续时间段的结核分枝杆菌临床分离菌株,采用比例法检测进行耐药性检测、间隔寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法进行分型研究。基因聚类分析采用BioNumerics 5.0数据库软件,统计学分析采用2检验,P0.05为差异有统计学意义。 结果 共收集到结核分枝杆菌临床分离菌株175株,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇全敏感115株,耐药60株(包括单耐药31株和耐多药29株)。经Spoligotyping分型,这些菌株可分为4个基因群49种基因型,最大的1个基因群为北京家族,占68.57%(120/175)。北京家族中,敏感菌株63.87%(76/119),耐药菌株占36.13%(43/119);非北京家族中,敏感菌株68.52%(37/54),耐药菌株占31.48%(17/54),北京家族与非北京家族的耐药率之间差异无统计学意义(P=0.551)。 结论 新疆结核分枝杆菌临床菌株存在明显的基因多态性,主要流行菌株为北京基因型。北京基因型与耐药性无明显相关性。
关键词: 结核分枝杆菌, 基因分型, 间隔寡核苷酸分型, 北京基因型
间隔区寡核苷酸分型法用于99株结核分枝杆菌杭州临床分离株的基因分型研究
王 勐, 刘志广, 赵秀琴, 董海燕, 刘洁, 张媛媛, 吕冰, 万康林
2008,23(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2008.5.300
目的 用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)鉴定杭州结核分枝杆菌临床分离株的基因分型种类和特征,为结核病防治研究提供基础科学依据。方法 收集结核分枝杆菌杭州临床分离株,应用Spoligotyping进行基因分型检测。基因聚类分析采用BioNumerics(Version 5.0)软件。结果 共在杭州市收集到99株结核分枝杆菌临床分离株,可分为2个基因群,即北京家族(Beijing family)和非北京家族(Non?鄄Beijing family),分别占64.65%(64/99)和35.35%(35/99),20种基因型,其中9株为独特类型,剩余90株分为11簇。北京家族菌株中,89.06%(57/64)为典型北京家族(Typical Beijing family),35株非北京家族菌株可分为16个基因型,10株为独特的基因型。结论 杭州结核分枝杆菌存在明显的基因多态性,北京家族菌株占优势,但非北京家族菌株基因多态性更显著。
关键词: 结核分枝杆菌, 间隔区寡核苷酸分型, 基因分型, 北京基因型
耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究
刘志广, 孙庆, 刘海灿, 肖彤洋, 赵秀芹, 万康林, 赵丽丽
2015,30(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.04.018
目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.
关键词: 耐多药结核分枝杆菌, 乙胺丁醇, 耐药, 突变
中国部分地区159株结核分枝杆菌临床分离株MLVA-19分型分析
吕冰, 刘梅, 李兆娜, 刘志广, 赵秀芹, 万康林
2009,24(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.05.016
目的初步了解中国部分地区结核分枝杆菌临床分离菌株数目可变串联重复序列(variable number of tandem repeats,VNTRs)基因多态性特征。 方法采用多位点VNTRs分析(multiple loci VNTRS analysis, MLVA)技术,随机选取159株中国部分地区结核分枝杆菌临床分离菌株,PCR和琼脂糖凝胶电泳技术,对结核分枝杆菌的19个VNTRs位点进行检测,用BioNumerics (Version 5.0) 软件进行结果分析,数据结果与国际MLVA数据库(http://minisatellites.u-psud.fr)比对,初步分析结核分枝杆菌DNA 多态性特征。结果159株菌株大致被分成4个主要的簇,其中73.8%的菌株为北京家族菌株,其次为H37Rv相似菌株及在数据库中没有比对结果的一簇,这一簇的MLVA特点是ETRD3,MIRU10、MIRU27、MIRU39、MIRU40及Mtub21位点结果为22221,与其他簇的菌株结果有比较明显的区别。可能是中国特有的菌株。另外发现与BCG相似的一簇。结论本次研究中的中国结核分枝杆菌具有明显的VNTR基因多态性,主要流行菌株为北京家族菌株,可能存在中国特异的VNTR基因型。BCG临床分离株的发现,提示BCG疫苗相关病例可能成为值得关注的卫生问题。
关键词: 结核分枝杆菌, 多位点数目可变串联重复序列分析, 基因分型, 卡介苗
琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究
綦廷娜, 刘志广, 王涛, 李培京, 叶长芸
2011,26(8) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.08.020
目的 探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值。 方法 分别以10倍连续稀释的O157 ∶ H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)。用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的最低检测限。 结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株stx2基因PCR产物的最低检测限为6.7102 cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的最低检测限为 4.3102 cfu(12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的最低检测限为6.710-1 cfu(56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的最低检测限为4.310-1 cfu(12.65 fg)/PCR体系。 结论 用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍。
关键词: 核酸印迹杂交, 琼脂糖凝胶电泳, 肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7, 猪链球菌2型, stx2基因, cps2J基因, 检测灵敏度
BACTEC MGIT 960 在二线抗结核药物药敏试验应用中的效果评价
赵丽丽, 夏强, 刘志广, 赵秀芹, 万康林
2011,26(3) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.03.008
目的 评价BACTEC MGIT 960进行4种二线抗结核药物药敏试验的效果。 方法 用MGIT 960对结核分枝杆菌临床分离菌株进行二线抗结核药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析。 结果 111株结核分枝杆菌临床分离株用MGIT 960法与L-J比例法卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星、乙硫异烟胺药敏符合率分别为 95.5%(106/111)、93.7%(104/111)、97.3%(108/111)、85.6%(95/111)。与比例法药敏结果比较,MGIT 960药敏检测的敏感度、特异度和准确性,卷曲霉素分别为80.0%、97.0%、95.5%,卡那霉素分别为92.3%、93.9%、93.7%,氧氟沙星分别为95.3%、98.5%、97.3%,乙硫异烟胺分别为100%、81.2%、85.6%。MGIT 960完成药敏试验的时间平均为8.3 d,L-J法平均为26.2 d,差异有统计学意义(P<0.01)。 结论 MGIT 960所得的药敏结果与传统比例法有较高的一致性,但检测时间较短,有利于耐药结核病患者的早期诊断和治疗。
关键词: BACTEC MGIT 960系统, 结核分枝杆菌, 比例法, 药敏试验

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