中国脑膜炎奈瑟菌penA基因及PBP2蛋白多态性研究
李马超, 郑玉红, 徐丽, 任红宇, 高源, 朱兵清, 田国忠, 邵祝军
2010,25(2) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2010.02.014
目的 掌握中国脑膜炎奈瑟菌对青霉素类抗生素敏感性的变化情况,探讨脑膜炎奈瑟菌菌株对青霉素敏感性降低的机制、敏感性变化与penA基因及PBP2蛋白多态性之间的关系。 方法 采用MIC肉汤稀释法和E-test药敏纸条法检测脑膜炎奈瑟菌菌株对青霉素的敏感性,并对penA基因进行扩增、测序,分析penA以及PBP2蛋白与菌株的青霉素敏感性变化的关系。 结果 通过肉汤稀释法和E-test法检测出4株对青霉素中介敏感菌株,未发现对青霉素耐药菌株;菌株的药物敏感性变化情况与penA及PBP2蛋白的多态性无明显关系,所检测菌株的PBP2高度保守。 结论 应该继续对流脑菌的青霉素敏感性变化情况开展基因水平监测,及时发现高耐药性菌株,防止耐药菌株克隆在人群间扩散。
关键词: 脑膜炎奈瑟菌, 敏感性, penA测序
利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用
关红, 秦天, 周海建, 任红宇, 段永翔, 许欣, 邵祝军
2013,28(1) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.018
目的 改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。 方法 使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。 结果 去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。 结论 该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。
关键词: 质粒, 脉冲场凝胶电泳, 军团菌
传染性非典型肺炎临床诊断病例血清标本不同非典型肺炎病原体抗体检测
邵祝军, 任红宇, 朱兵清, 李马超, 徐建国
2005,20(9) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2005.9.457
目的研究传染性非典型肺炎(SARS)临床诊断病例血清标本中常见的不同非典型肺炎病原体感染抗体分布情况。方法选取2003年SARS流行期间90份SARS临床确诊病例血清标本和40份健康志愿者血清标本进行血清抗体检测。结果90份临床诊断的传染性非典型肺炎(SARS)病例急性期血清标本中,21.1%(19/90)标本SARS抗体阳性,79.9%(71/90)标本SARS抗体阴性。肺炎支原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、军团菌、肺炎衣原体等抗体检测呈现不同的分布。结论2003年SARS流行期间,SARS抗体阴性的传染性非典型肺炎临床确诊病例可能存在或合并其它病原体感染。
关键词: 传染性非典型肺炎, 临床诊断病例, 抗体检测
鉴别29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌聚合酶链反应方法的建立及应用
徐丽, 朱兵清, 高源, 任红宇, 邵祝军
2009,24(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.04.020
目的建立鉴别29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌的聚合酶链反应(PCR)方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌IctrA/I基因变异区序列,设计合成PCR引物,分别用于扩增29E群、X群和Z群等3个血清群脑膜炎奈瑟菌。并将该方法应用于41份疑似脑膜炎奈瑟菌菌株标本的检测。结果3对引物分别能够特异性PCR扩增29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌菌株的IctrA/I基因,扩增片段大小分别为667 bp、525 bp和667 bp,3个血清群之间以及与其他血清群脑膜炎奈瑟菌之间未出现交叉PCR扩增。41份疑似脑膜炎奈瑟菌菌株标本中,29E群和X群PCR阳性的标本分别有7份和2份,未检测出Z群菌株。结论本研究建立的PCR方法能准确、特异地鉴定29E群、X群和Z群脑膜炎奈瑟菌菌株。
关键词: 脑膜炎奈瑟菌, 聚合酶链反应, 变异区
环境水系分离嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳的分型研究
任红宇, 朱兵清, 周海健, 邵祝军
2009,24(12) . doi: DOI 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.12.023
目的 初步揭示中国环境水系嗜肺军团菌分离株的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型特征。方法 分别以SfiI和AscI为限制性内切酶,使用PFGE对菌株进行分型和聚类分析。 结果 单独使用SfiI、AscI和联合使用两种内切酶分别将78株嗜肺军团菌分为47、48和60个型别,分型得到的Simpson 差异指数分别为0.9833、0.9817和0.9933;同一水系中分离的菌株既有带型相同或者相似者,又有带型差异较大者;相同型别的菌株可在同一水系中跨年份存在。结论 PFGE对嗜肺军团菌具有很好的分辨率;多个克隆系的菌株可以在同一水系中共存,某些克隆系的菌株可以跨年份存在;环境水系中存在优势克隆系,这些优势克隆系应该在今后军团菌的监测中引起注意。
关键词: 嗜肺军团菌, 脉冲场凝胶电泳, 分子分型
血清群6肺炎链球菌分子分型与耐药特征研究
李马超, 任红宇, 周海健, 高源, 邵祝军
2012,27(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.4.005
目的 比较不同方法鉴别血清群6肺炎链球菌不同血清型的能力,了解血清群6肺炎链球菌的耐药性与分子特征。 方法 采用荚膜肿胀分型方法与聚合酶链反应(PCR)分型方法鉴别33株血清群6肺炎链球菌的血清型及相应的基因型;检测菌株对6种常用抗生素的敏感性;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析不同血清型菌株的基因组特征。 结果 PCR分型方法与传统的血清学分型方法结果一致。全部菌株对阿奇霉素均耐药,对利福平及左氧氟沙星均敏感;6B型菌株呈现较高的多重耐药特征。根据PFGE带型特征,所有菌株可分为2个簇,6C菌株之间、6B菌株之间带型呈现较高相似性。 结论 PCR分型方法可用于鉴别血清群6菌株的不同血清型;菌株耐药情况严重,且大多数菌株呈多重耐药特征;PFGE对鉴别肺炎链球菌不同菌株间的差异有较高的分辨率。
关键词: 肺炎链球菌, 血清分型, 抗生素敏感性, 脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳用于军团菌分型能力的评价
秦天, 任红宇, 周海健, 邵祝军
2011,26(3) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.03.006
目的 评价脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术用于军团菌属不同种(Legionella species)以及不同血清型菌株的分型能力。 方法 选用117株10个嗜肺军团菌血清型,30种非嗜肺军团菌的参考菌株和我国环境分离菌株,采用AscⅠ内切酶酶切,进行PFGE。从电泳条带的数量和分布、PFGE的分型力、分辨率和与流行病学资料的相关性等4个方面评价PFGE用于军团菌属不同血清型的嗜肺军团菌以及30个非嗜肺军团菌种分型的能力。 结果 通过AscⅠ酶切、PFGE电泳后,所有血清型的嗜肺军团菌和17种非嗜肺军团菌能获得条带数量适合、且在电泳图谱上条带分布均匀,而另外13种非嗜肺军团菌株条带集中在小分量片段;PFGE能对所有117株选入实验的军团菌进行分析,分型力为100%;AscⅠ-PFGE将43株不同来源的各血清型嗜肺军团菌分成41个不同的型,分型D值为0.9978,将30株非嗜肺军团各自分为不同的型;AscⅠ-PFGE可以将相同来源的嗜肺军团菌和L. micdadei军团菌分为相同或者相似的型,成簇聚类。 结论 AscⅠ-PFGE对所有血清型的嗜肺军团菌和17种非嗜肺军团菌进行PFGE分型, 能够获得高质量的电泳图谱,可成功用于嗜肺军团菌的流行病学调查。
关键词: 军团菌, 脉冲场凝胶电泳, 分子分型
四种检测方法用于上海市口岸管道水军团菌存在状况调查的研究
任红宇, 田桢干, 周海健, 关红, 秦天, 邵祝军
2014,29(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.201.06.009
目的 比较传统的平板培养法、普通聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, real-time PCR)和荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)结合荧光定量PCR的方法(EMA-荧光定量PCR)对管道水中军团菌的检测效果。 方法 于2010年对上海市2个口岸管道水进行采样,共采集132份。分别采用传统的平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR对水样中军团菌进行定性和/或定量分析。 结果 对132份管道水标本进行军团菌定性检测,平板培养法、普通PCR、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检出军团菌污染率分别为18.9%、20.5%、24.2%和24.2%。3种定量方法(平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR)对阳性标本中军团菌定量数值分别为50~1320菌落形成单位/升(cfu/L)、 20~13 085基因单位/升(GU/L)和10~4480 GU/L。对于132份水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值大小差异有统计学意义(2=193.6, P0.01),其中荧光定量PCR的定量数值最高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值最低。 结论 上海市口岸管道水中军团菌污染率和含菌量高。荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测管道水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法, EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测。
关键词: 军团菌, 管道水, 实时荧光定量聚合酶链反应, EMA-荧光定量PCR

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