北京地区腹泻就诊患者中肠致病性大肠埃希菌分离株特征分析
高翔, 赵红庆, 甄博珺, 张兰荣, 张冲, 邹林, 李洪军, 赵爱兰, 王宝兰, 刘晓峰, 熊衍文
2013,28(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.5.005
目的 分析北京市通州区腹泻就诊患者中肠致病性大肠埃希菌(EPEC)分离株的特征。 方法 eaeA基因聚合酶链反应(PCR)扩增阳性的菌株,进行系统生化鉴定、EPEC诊断血清分型、bfpA基因PCR扩增以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。 结果 20株成年人腹泻患者EPEC分离株中,仅1株鉴定为O126血清群;4株儿童腹泻患者分离株中,仅1株鉴定为O26血清群。儿童与成年人腹泻患者EPEC分离株bfpA基因均为阴性。23株EPEC菌株的PFGE带型呈高度多态性,聚类图显示与患者年龄及性别无明显相关。 结论 北京市通州区腹泻患者EPEC分离株以非典型为主,单纯通过血清群来诊断EPEC的方法,将会造成极大的漏诊。
关键词: 感染性腹泻, 致泻性大肠埃希菌, 肠致病性大肠埃希菌
鉴定五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法
赵爱兰, 熊衍文, 白雪梅, 张少敏, 王艳, 孙晖, 叶长芸
2011,26(1) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.01.020
目的 建立一种快速鉴定和鉴别五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法。 方法 利用五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的毒力基因stx1、stx2、eaeA、lt、stIb、aggR、ipaH及16S rRNA基因rrs,建立8重PCR反应体系,并对PCR引物、反应体系和循环条件进行优化。 结果 8对PCR引物均能特异地扩增相应的基因。对本实验室87株大肠埃希菌及志贺菌的检测结果与先前应用单重PCR的鉴定结果完全一致。 结论 采用内对照基因和毒力基因建立的多重PCR方法既能在一个反应体系中鉴定和区分五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌,又能评价PCR体系的反应效率,为五类致泻性大肠埃希菌的快速鉴定和鉴别提供了一种有效检测手段。
关键词: 致泻性大肠埃希菌, 多重PCR方法, 内参照基因
一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定
王蕾, 叶长芸, 赵爱兰, 许彦梅, 徐建国
2007,22(7) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2007.7.441
目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.
关键词: 肠出血性大肠杆菌O157:H7, 志贺毒素, 鉴定
猪链球菌的药物敏感性及耐药基因检测
白雪梅, 叶长芸, 张少敏, 赵爱兰, 徐建国
2009,24(12) . doi: DOI 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.12.005
目的 探讨猪链球菌对各类药物的耐药性及其耐药基因的检测。方法 我们对2005-2007年分离自四川、广西、贵州、广东等地的56株猪链球菌用api-strep生化鉴定条进行生化鉴定,采用微量稀释法进行药物敏感性分析,PCR检测耐药基因。 结果 在所检测的13种抗生素中,56株猪链球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、美罗培南、左旋氟沙星、氯霉素、红霉素、阿齐霉素、克林霉素、万古霉素均敏感,但均对四环素耐药。使用PCR方法检测了编码四环素耐药的tet(K)、tet(L)、tet(M)、tet(O)、tet(Q)等基因,发现所有检测的菌株均携带tet(M)基因。 结论 猪链球菌可能在进化过程中获得了tet(M)基因,而tet(M)的扩散可能和在饲养过程中大量使用四环素类药物添加剂有关。
关键词: 猪链球菌, 微量稀释法, tet(M) 耐药基因
tccP2基因在临床分离肠致病性大肠埃希菌中的特征分析
白莉, 白雪梅, 赵爱兰, 叶长芸, 徐建国
2011,26(2) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2011.02.005
目的 分析2001 - 2003年某省儿童医院分离的268株大肠埃希菌 tccP2 基因的携带情况及该基因的分子特征。 方法 PCR方法筛查临床分离的268株大肠埃希菌中EHEC、EPEC菌株;再筛查 tccP2 基因的携带情况,克隆阳性菌株 tccP2 基因,并进行核苷酸测序,同时与GenBank数据库进行比对。 结果 2001 - 2003年临床分离的菌株共检测到7株EPEC菌株,其中有2株菌 tccP2 基因阳性,长度分别为1458 bp,核苷酸和氨基酸的一致性为100%,与国际上公布的str.11128(O111 ∶ H-)菌株的 tccP2 基因比对发现核苷酸一致性为61.3%;氨基酸序列比对,发现其N-端与str.11128(O111 ∶ H-)菌株具有完全相同的特异的87个核苷酸序列,脯氨酸富集重复片段序列几乎一致,较str.11128(O111 ∶ H-)菌株多4个重复片段。 结论 在中国临床分离的菌株中也存在具有 tccP2 基因的EPEC菌株,应进一步加大临床标本中该类菌株的分离与监测。
关键词: 基因特征, 肠致病性大肠埃希菌, tccP2 基因
大肠埃希菌(EHEC/EPEC)紧密黏附素基因的分型分析
陈强, 卢珊, 赵爱兰, 熊衍文
2012,27(2) .
目的 了解大肠埃希菌分离株eaeA基因的多态性。 方法 对不同来源的60株大肠埃希菌分离株的eaeA基因进行聚合酶链反应扩增后直接测序,测序结果在NCBI中进行BLASTn比对,根据比对相似性判定eaeA基因的型别。将获得型别的序列与GenBank中肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic Escherichia coli, EPEC)和肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli, EHEC)代表性菌株型别的序列用Neighbor-joining法构建系统发生树,分析其进化关系。 结果 所有EHEC分离株的eaeA基因均为γ型,且序列完全一致。EPEC分离株的eaeA基因型以β1型为主,同时存在ε, κ, ι2, θ型。 结论 EHEC分离株的eaeA基因相对保守,型别单一,而EPEC分离株的eaeA基因表现出较大的多态性。
关键词: 大肠埃希菌, eaeA基因, 分型
非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及黏附相关基因分析
赵爱兰, 金东, 白向宁, 徐建国, 熊衍文
2012,27(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.6.004
目的 了解我国部分地区非O157产志贺毒素大肠杆菌分离株的志贺毒素基因变种及其黏附相关基因,为进一步研究致病机制提供依据。 方法 采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对29株分离菌株的stx1、stx2基因全长扩增并测序,通过与GenBank中已公布的变种序列比对确定菌株stx1、stx2基因的变种类型。对位于LEE毒力岛上的eaeA、escF、escC、tir、espA、espB、espD基因及LEE以外其他黏附相关基因iha、toxB、efa1、sfpA、lpfAO157/OI-141、 lpfAO157/OI-154、saa、lpfAO113、eibG进行PCR检测。 结果 25株stx1阳性菌株中有13株携带stx1a原毒素,12株携带stx1c变种;10株stx2阳性菌株中,7株携带stx2d变种,1株为stx2a原毒素,1株携带stx2g变种,1株携带与stx2e A亚单位、stx2d B亚单位最接近的stx2变种。LEE岛上的7个基因检测结果均为阴性,黏附相关基因iha阳性率为89.7%(26/29),saa阳性菌株3株、eibG阳性菌株1株,其余6个黏附相关基因均为阴性。 结论 我国部分非O157 STEC菌株的志贺毒素基因以stx1c、stx2d变种为主,LEE毒力岛不存在,而黏附相关基因iha广泛存在于不同血清型的产志贺毒素大肠杆菌菌株中。
关键词: 非O157产志贺毒素大肠杆菌, 志贺毒素基因变种, 黏附基因
产志贺毒素大肠埃希菌分离株多位点可变数目串联重复序列分析
赵爱兰, 白向宁, 孟琼, 刘凯, 熊衍文
2013,28(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.5.013
目的 探讨多位点可变数目串联重复序列分析[multiple-locus VNTR (variable-number tandem repeats) analysis,MLVA]分型方法对产志贺毒素大肠埃希菌分离株的分型效果,初步了解菌株分子流行病学特征。 方法 采用7个VNTR位点对70株产志贺毒素大肠埃希菌分离株进行分析,并根据多态性位点的重复数目利用BioNumerics软件进行聚类分析。 结果 70株菌株被分为46种MLVA型别,O157与非O157菌株可分为A、B两个明显不同的群。除少部分菌株外,不同宿主来源、志贺毒素型别及血清型的非O157菌株与MLVA型别存在较好的相关性。 结论 7个VNTR位点的MLVA分型方案对于产志贺毒素大肠埃希菌的菌株分型、暴发溯源等具有一定的参考价值,但仍需进一步完善。
关键词: 产志贺毒素大肠埃希菌, 可变数目串联重复序列分析, 分子分型
肠集聚性大肠埃希菌分离株脉冲场凝胶电泳分析
孙晖, 刘学通, 赵爱兰, 金东, 熊衍文, 卢珊
2013,28(10) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.10.006
目的 对我国散发腹泻患者肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)分离株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,以了解其分子流行病学特征并初步建立我国EAEC菌株的基础数据库。 方法 参照PulseNet大肠埃希菌O157:H7的PFGE实验方法对52株EAEC分离株进行分析,并使用BioNumerics软件进行聚类。 结果 在限制性内切酶XbaⅠ和PulseNet推荐的电泳参数下,菌株基因组酶切片段分布均匀,条带易于识别。52株EAEC分离株产生了48种PFGE带型,初步聚类为A~N 14个群,不同地区来源及不同HEp-2细胞黏附表型的菌株广泛分布在不同PFGE聚类群中。 结论 我国散发腹泻患者EAEC分离株呈现高度多态性,PFGE电泳参数和限制性内切酶XbaⅠ适用于我国EAEC菌株的分析。
关键词: 肠集聚性大肠埃希菌, 集聚性黏附, 脉冲场凝胶电泳, 分子分型
多重PCR方法鉴定六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌
张网, 白向宁, 赵爱兰, 许彦梅, 熊衍文
2016,31(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.05.015
目的 建立一种快速检测和鉴定六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法。方法 根据六类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的毒力基因eae、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、aggR、ipaH、afaD及16S rRNA基因rrs建立多重PCR反应体系,优化引物浓度、PCR反应条件等,评价该方法的特异性和灵敏度,并用该方法鉴定本实验室保存的174株致泻性大肠埃希菌和24株志贺菌,将结果与单重PCR、本实验室已建立的鉴定五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法结果进行对比。结果 10对PCR引物均可特异性扩增相应基因片段。该反应体系对174株致泻性大肠埃希菌和24株志贺菌的鉴定结果与单重PCR检测结果一致,本研究的多重PCR检测下限可达4.56 101 CFU/反应(1.14 104 CFU/ml)。结论 本研究采用毒力基因及内参照基因建立的多重PCR方法可在一个反应体系中鉴定和区分致泻性大肠埃希菌和志贺菌,为临床快速检测、疾病预防控制实验室筛查、腹泻的暴发溯源等提供了方便快捷的技术支持。
关键词: 致泻性大肠埃希菌, 多重PCR, 毒力基因

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