574例结核病病例细菌学检验结果分析
张媛媛, 张选民, 王艳, 曾令城, 刘志广, 王西临, 赵秀芹, 韩跃玲, 杜新玲, 王春娟, 朱艳伶, 万康林
2006,21(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2006.6.299
目的了解西安市分支杆菌病原菌感染的流行状况,为制定结核病防治措施提供科学依据。方法采用流行病学抽样调查方法,选取陕西省西安市为调查点,于2005年5~8月对其13个区级结防所就诊的所有病人进行调查,每个病人收集三份痰标本。采用痰涂片和痰培养法检测病人痰标本,鉴别培养基培养法鉴定分支杆菌菌种。结果574位病人,涂片阳性113人,阳性率为19.69%,培养阳性病人150人,阳性率26.13%。后者明显高于前者,两者之间的差异具有显著统计学意义(!2=360.50,P<0.01),两者联合阳性率为26.83%。从137例病例痰标本中分离到251株分支杆菌菌株,结核分支杆菌、牛分支杆菌、非结核分支杆菌(NTM)和混合感染的比例分别是67.88%、5.84%、11.68%、14.60%。结论细菌培养法可明显提高阳性率;NTM感染流行状况应予以足够的重视。
关键词: 细菌学检验, 痰培养, 痰涂片, 菌种鉴定
内蒙古地区结核分枝杆菌串联重复序列基因多态性分析
苏云开, 余琴, 吕冰, 马岩, 连璐璐, 杨晓敏, 董海燕, 刘耀, 赵秀芹, 吴移谋, 万康林
2013,28(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.4.004
目的 了解内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株的串联重复序列(variable number tandem repeat,VNTR)基因多态性和VNTR基因型构成,及不同VNTR位点在该地区结核分枝杆菌基因分型中的应用。 方法 从内蒙古自治区结核病防治研究所收集临床分离的结核分枝杆菌菌株及其病例背景资料,采用多位点串联重复序列分析(MLVA)对收集的菌株进行22个VNTR 位点分析,计算Hunter-Gaston 指数(HGDI),分析各个位点的分辨率, 同时用BioNumerics 软件对VNTR结果进行聚类分析。且统计学分析民族与主要基因型间的关系。 结果 372株菌共分为308个基因型,47簇,261个独特基因型,成簇率为17.20%。22个VNTR位点的基因多态性存在较大的差异,位点VNTR3820(HGDI 0.838)的分型分辨能力最高,MIRU23(HGDI 0.068)和MIRU27(HGDI 0.083)分型分辨能力较差。随着VNTR 位点的增加,分型的分辨能力也有所提高。Ⅰ群基因型菌株与民族易感性的分析表明,汉族与蒙古族间Ⅰ群基因型菌株分布差异无统计学意义(χ2=0.337, P=0.561>0.05)。 结论 内蒙古地区结核分枝杆菌临床分离株基因具有多态性,不同VNTR位点在内蒙古地区结核分枝杆菌中具有不同的分辨能力。且Ⅰ群基因型为该地区主要流行株,而Ⅰ群基因型菌株与民族易感性间无关联。
关键词: 结核分枝杆菌, 可变数目串联重复序列, 基因多态性, 多位点串联重复序列分析
新疆结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因型的初步研究
綦迎成, 刘洁, 鱼栓民, 李君莲, 赵秀芹, 王泉, 刘志广, 吕冰, 刘中华, 万康林
2010,25(12) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2010.12.007
目的 研究新疆结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型,初步了解其基因型多态性状况及主要流行株。 方法 在新疆维吾尔自治区胸科医院收集一个连续时间段的结核分枝杆菌临床分离菌株,采用比例法检测进行耐药性检测、间隔寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法进行分型研究。基因聚类分析采用BioNumerics 5.0数据库软件,统计学分析采用2检验,P0.05为差异有统计学意义。 结果 共收集到结核分枝杆菌临床分离菌株175株,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇全敏感115株,耐药60株(包括单耐药31株和耐多药29株)。经Spoligotyping分型,这些菌株可分为4个基因群49种基因型,最大的1个基因群为北京家族,占68.57%(120/175)。北京家族中,敏感菌株63.87%(76/119),耐药菌株占36.13%(43/119);非北京家族中,敏感菌株68.52%(37/54),耐药菌株占31.48%(17/54),北京家族与非北京家族的耐药率之间差异无统计学意义(P=0.551)。 结论 新疆结核分枝杆菌临床菌株存在明显的基因多态性,主要流行菌株为北京基因型。北京基因型与耐药性无明显相关性。
关键词: 结核分枝杆菌, 基因分型, 间隔寡核苷酸分型, 北京基因型
间隔区寡核苷酸分型法用于99株结核分枝杆菌杭州临床分离株的基因分型研究
王 勐, 刘志广, 赵秀琴, 董海燕, 刘洁, 张媛媛, 吕冰, 万康林
2008,23(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2008.5.300
目的 用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)鉴定杭州结核分枝杆菌临床分离株的基因分型种类和特征,为结核病防治研究提供基础科学依据。方法 收集结核分枝杆菌杭州临床分离株,应用Spoligotyping进行基因分型检测。基因聚类分析采用BioNumerics(Version 5.0)软件。结果 共在杭州市收集到99株结核分枝杆菌临床分离株,可分为2个基因群,即北京家族(Beijing family)和非北京家族(Non?鄄Beijing family),分别占64.65%(64/99)和35.35%(35/99),20种基因型,其中9株为独特类型,剩余90株分为11簇。北京家族菌株中,89.06%(57/64)为典型北京家族(Typical Beijing family),35株非北京家族菌株可分为16个基因型,10株为独特的基因型。结论 杭州结核分枝杆菌存在明显的基因多态性,北京家族菌株占优势,但非北京家族菌株基因多态性更显著。
关键词: 结核分枝杆菌, 间隔区寡核苷酸分型, 基因分型, 北京基因型
中国首例脓毒分枝杆菌感染肺病报告
赵秀芹, 邓建平, 连璐璐, 董海燕, 张敬蕊, 李桂莲, 肖体权, 李群, 万康林
2012,27(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.6.023
目的 分析脓毒分枝杆菌感染肺病的临床和细菌学特征,探讨其鉴别诊断方法。 方法 分析脓毒分枝杆菌感染肺病患者的临床表现极其相关实验室检查结果。对其临床分离株采用L-J,TCH/PNB鉴别培养基和多位点PCR初步鉴别,rpoB/hsp65基因PCR-测序鉴定出菌种。 结果 该患者痰涂片和培养检测为阳性。L-J,TCH/PNB鉴别培养基和多位点PCR鉴别为非结核分枝杆菌。rpoB/hsp65基因PCR-测序,经BLAST比对,与脓毒分枝杆菌(ATCC 700731)同源性均为99%。药物敏感性检测证实本病例分离到的菌株对大多数药物(包括四种一线抗结核药物)耐药,而对阿米卡星、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、卡那霉素和新诺明等药物敏感。 结论 在中国首次鉴定、确诊脓毒分枝杆菌感染肺病。
关键词: 非结核分枝杆菌肺病, 非结核分枝杆菌, 脓毒分枝杆菌
结核分枝杆菌抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的克隆表达及血清诊断学初步评价
夏远志, 王雪枝, 刘海灿, 李马超, 赵秀芹, 楼永良, 吕建新, 万康林
2016,31(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.04.004
目的 评价结核分枝杆菌蛋白抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868的血清诊断价值和潜在应用前景。方法 以结核分枝杆菌H37Rv标准株全基因组DNA为模板扩增得到Rv2654c、Rv1985c和Rv3868基因的完整序列, 并与表达载体pET-32a构建重组质粒。原核表达Rv2654c、Rv1985c和Rv3868蛋白, 利用亲和层析的方法进行纯化。采用棋盘滴定的方法, 确定各抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)最佳反应条件, 并应用190份血清进行血清IgG抗体检测, 结合受试者工作特征曲线(ROC)对其诊断效能进行分析和评价。通过ROC计算各抗原组合的诊断效能, 确定最佳组合方案。结果 成功构建了重组蛋白, 对重组后的片段进行测序, 经BLAST比对与目的基因完全一致, 且能够稳定表达。对经纯化后的3种蛋白进行ELISA检测, 经统计学分析, Rv2654c、Rv1985c和Rv3868抗原的诊断效能分别达到73.16%、56.84%和71.05%。结合ROC得到最佳的抗原组合方案为Rv2654c+Rv3868, 其敏感性、特异性和诊断效能分别达到78.95%、72.63%和75.79%。结论 结核分枝杆菌重组抗原Rv2654c、Rv1985c和Rv3868具有作为结核病诊断抗原的潜力, 可以作为结核病免疫学快速诊断的候选蛋白。抗原组合Rv2654c+Rv3868具有较高的诊断效能, 有较好的潜在应用价值。
关键词: 结核分枝杆菌, 特异性抗原, 克隆表达, 酶联免疫吸附试验
自贡市非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定结果分析
邓建平, 刘海灿, 王斌, 张红梅, 张正东, 宁柱, 赵秀芹, 李群, 万康林
2017,32(3) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2017.03.016
目的 对自贡市35株疑似非结核分枝杆菌(NTM)临床分离株进行菌种鉴定。方法 从自贡市各区(县)及市结核病防治获得的临床分枝杆菌分离株,通过罗氏培养基(L-J)、对硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养基初步鉴定为NTM,再经多位点PCR方法确定为NTM后,对rpoB、hsp64及its基因进行测序及分析鉴定。结果 35株疑似NTM临床分离株,通过初步鉴别,多位点PCR,rpoB、hsp64及its基因测序及分析鉴别出32株NTM,分别为脓肿分枝杆菌(M. abscessus)11株、胞内分枝杆菌(M. intracellulare)7株、堪萨斯分枝杆菌(M. kansasii)5株、鸟分枝杆菌(M. avium)3株、脓毒分枝杆菌(M. septicum)1株、马赛分枝杆菌(M. masseillense)1株、戈登分枝杆菌(M. gordonae)2株、副瘰疬分枝杆菌(M. parascrofulaceum)1株和Mycobacterium peregrinum 1株。结论 抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为NTM的临床分离株中包含不同种类的NTM,自贡市NTM肺病的病原种类较多,以快生长脓肿分枝杆菌为主,其次为慢生长不产色菌的胞内分枝杆菌和缓慢生长光产色菌的堪萨斯分枝杆菌。实验室应开展进一步菌种鉴定,以指导临床正确诊断和合理治疗。
关键词: 非结核分枝杆菌, 菌种鉴定, 基因测序
多位点PCR技术用于四川267株分枝杆菌临床分离株的鉴定
邓建平, 董海燕, 李群, 赵秀芹, 连璐璐, 肖体权, 万康林
2012,27(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.4.021
目的 初步了解四川省肺结核患者分枝杆菌菌种类型。 方法 收集267株分枝杆菌临床菌株,经PNB/TCH鉴别培养基进行培养鉴定后,采用聚合酶链反应(PCR)对16S rRNA、Rv0577、IS1561、Rv1510、Rv1970、Rv3877/8和Rv3120 基因位点进行扩增,鉴定至种,再经PRA-rpoB、hsp65基因测序进行验证。 结果 267株分枝杆菌临床分离株多位点PCR结果显示结核分枝杆菌262株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,非结核分枝杆菌2株。PNB/TCH鉴别培养基培养鉴定结果为结核分枝杆菌复合群266株,非结核分枝杆菌1株。2株非结核分枝杆菌分别为鸟分枝杆菌(M. avium)和脓毒分枝杆菌(M. septicum)。多位点PCR结果与rpoB-PRA、hsp65基因测序结果一致。 结论 多位点PCR技术鉴定分枝杆菌菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值,且对于临床诊断和治疗都具有重要意义。
关键词: 多位点聚合酶链反应, 分枝杆菌, 菌种鉴定
针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究
郭倩, 李桂莲, 魏剑浩, 赵丽丽, 赵秀芹, 吴移谋, 万康林
2015,30(3) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.03.013
目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果。方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照。结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49%(41/59)、100%(51/51),符合度为83.63%;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56%(40/41),98.55%(68/69),符合度达98.18%。结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度。
关键词: 结核分枝杆菌, 喹诺酮, 耐药, 反向斑点杂交
耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究
刘志广, 孙庆, 刘海灿, 肖彤洋, 赵秀芹, 万康林, 赵丽丽
2015,30(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2015.04.018
目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.
关键词: 耐多药结核分枝杆菌, 乙胺丁醇, 耐药, 突变
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