沙门菌监测点汤卜逊沙门菌分离株的分子分型和耐药性分析
梁未丽, 王洪霞, 周海健, 李志锋, 许学斌3, 李勤2, 张代涛, 陈春霞, 于礼, 闫梅英, 章丽娟, 冉陆, 阚飙
2009,24(6) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.06.014
目的应用分子分型技术对2007年上海和重庆市沙门菌监测点的50株汤卜逊沙门菌进行分子流行病学分析和抗生素敏感性测定,了解上海和重庆两地菌株的分子分型特征和药物敏感性特征。方法抗生素敏感性测定采用微量肉汤稀释法,分子分型方法包括脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点串联重复序列分析(MLVA)。结果药敏试验显示78%的菌株存在多重耐药,其中磺胺甲恶唑和四环素的耐药率最高,其次是甲氧苄胺嘧啶;对头孢类抗生素(头孢噻肟、头孢三嗪、头孢他啶、头孢噻呋)均未产生耐药性。PFGE将50株菌分为15个带型,30株重庆分离株间有较高的相似性;MLVA分析显示除Sal16位点外,其余检测位点在所有待检菌株中没有差别。结论分子分型支持汤卜逊沙门菌引起的暴发以及散发。目前MLVA分型应用于汤卜逊沙门菌分子分型时,分型能力低于PFGE,需要进一步优化。
关键词: 汤卜逊沙门菌, 脉冲场凝胶电泳, 多位点串联重复序列分析, 分子分型
37株枸橼酸杆菌的耐药性及PFGE分型分析
白莉, 汪永禄, 金东, 白雪梅, 周海健, 刘燕, 陶勇, 石志峰, 叶长芸, 徐建国
2009,24(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.05.004
目的了解食品及患者来源的37株枸橼酸杆菌的耐药性、毒力基因携带及PFGE的分型情况。方法运用K-B法选择15种抗生素进行药敏试验;以PCR方法检测志贺样毒素(Istx1/I和Istx2/I)、紧密素基因(Ieae/I)及溶血素(Ihly/I)4种毒力基因;用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行同源性分析。结果37株枸橼酸杆菌中,25株为杨氏枸橼酸杆菌,11株为弗劳地枸橼酸杆菌,1株为布雷克氏枸橼酸杆菌。分离菌株对大多数抗生素敏感,但对头孢噻吩100%耐药。其毒力基因检测均为阴性。PFGE结果发现不同菌株带型差异较大。其中5株食品来源,1株为人来源的杨氏枸橼酸杆菌同为MAS007型,具有流行病学相关性。 结论该地区枸橼酸杆菌主要以杨氏枸橼酸杆菌为主;部分菌株具有多重耐药,应加强菌株的耐药性监测;脉冲场凝胶电泳对枸橼酸杆菌有较好的分型能力,有助于分析追踪疫情和来源;患者可能存在食源性感染,应引起疾控部门的重视。
关键词: 枸橼酸杆菌, 耐药性, 脉冲场凝胶电泳
2009年中国流行性脑脊髓膜炎监测结果分析
李军宏, 李艺星, 邵祝军, 周海建, 宁桂军, 尹遵栋, 罗会明, 梁晓峰
2010,25(10) .
目的 分析中国2009年流行性脑脊髓膜炎(流脑)发病情况及国家级监测点所在省流行病学监测和实验室监测结果,评价流脑流行现状及特征,为加强预防控制流脑暴发流行提供参考资料。 方法 利用国家级监测点所在省上报资料、法定传染病报告系统资料、流脑单病/专病监测信息报告管理系统资料、中国疾病预防控制中心(CDC)传染病预防控制所国家流脑实验室检测资料对2009年流脑监测结果进行分析。 结果 2009年全国流脑报告发病率0.05/10万, 国家级监测点中以安徽省发病数较多(76例);15岁儿童平均发病率为 0.23/10万,儿童、学生报告病例数分别占监测省报告病例总数的42.14%和30.07%。监测省报告病例中检出A群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)占23.16%,B群占4.21%, C群Nm占65.26%;健康人群中检出A群Nm占10.87%,B群Nm占28.26%,C群Nm占22.83%;健康人群A群Nm抗体阳性率平均为75.51%,C群为65.71%。 结论 中国流脑C群Nm检出比例逐年增多,病例最多的安徽省已成为C群流脑病例为主;健康人群带菌以B群Nm为主,C群Nm抗体阳性率明显低于A群。应针对薄弱环节,继续加强流脑监测,防止流脑暴发、流行。
关键词: 流行性脑脊髓膜炎, 流行病学监测, 病原学监测
PulseNetChina网络实验室能力考核结果评价与分析
崔晶花, 杜小莉, 崔志刚, 刁保卫, 娄静, 周海健, 阚飙, 李伟
2011,26(10) .
目的 为促进中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulseNet China网络实验室执行技术标准,实现监测技术的统一化、标准化、规模化。 方法 PulseNet China对19个具有脉冲场凝胶电泳(PFGE)设备的省(市)疾病预防控制中心相关实验室开展了分子分型技术考核。 结果 被考核单位中有78.9%的单位通过评价考核,递送的图谱带型经过软件分析得到相似度为100%。 结论 说明这些实验室PFGE技术条件和技术能力已经达到PulseNet China实验室网络化监测的要求。对PFGE考核谱图存在的问题分析了相应原因,提供了可能的解决方案。
关键词: 分子分型, 监测, 实验室网络, 脉冲场凝胶电泳, 实验室能力考核
陕西省ST4821克隆群的B群 脑膜炎奈瑟菌的发现
王增国, 侯铁军, 魏晓光, 孙亚辉, 马超锋, 吴守芝, 李平, 周海健
2011,26(4) .
目的 针对一起流行性脑脊髓膜炎疫情的处理,对患者标本及其接触者进行脑膜炎奈瑟菌检验,了解感染原因、分析密切接触者的脑膜炎奈瑟菌携带情况及菌株的分子流行病学特征。 方法 对患者标本和接触者的咽拭子标本同时进行分离培养并提取核酸,PCR检测脑膜炎奈瑟菌;分离菌株和患者血清核酸进行血清分群及多位点序列分型(MLST)分析。 结果 患者血清及4份咽拭子标本核酸检测ctrA基因阳性。其中密切接触者中分离到3株脑膜炎奈瑟菌;患者血清标本及分离菌株均为B群脑膜炎奈瑟菌;MLST分型显示患者血清为ST4821序列型、其余3株细菌分别为ST7623、ST4821、ST5586。 结论 实验显示一种高致病性的ST4821型脑膜炎奈瑟菌已存在于陕西省健康人群中并引发感染病例致患者死亡,应全面了解本地区脑膜炎奈瑟菌的健康携带和病例状况。
关键词: 脑膜炎奈瑟菌, 分布, 多位点序列分型
临床来源碳青霉烯耐药大肠埃希菌药物敏感性及分子流行病学特征分析
贾园春, 袁敏, 陈东科, 周海健, 陈霞, 赵晓菲, 李娟, 陈会波
2017,32(4) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2017.04.021
目的 探讨临床分离的碳青霉烯耐药大肠埃希菌药物敏感性特征及分子流行病学特征,为院内感染控制及临床治疗提供基础数据。方法 收集某医院临床分离的21株对碳青霉烯类药物耐药的大肠埃希菌,采用琼脂稀释法测定菌株对11种临床常用药物的最低抑菌浓度(MIC);Carba NP试验检测菌株产碳青霉烯酶情况;采用PCR扩增及序列比对检测耐药基因(包括blaNDM、blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaOXA)携带状况;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行分子分型。结果 21株碳青霉烯耐药大肠埃希菌中,对哌拉西林、头孢吡肟、头孢曲松、头孢他啶等-内酰胺类药物和左氧氟沙星耐药率为100.00%;对甲氧苄啶-磺胺甲恶唑的耐药率也高达76.19%;对米诺环素、阿米卡星和磷霉素的耐药率相对较低,分别为23.81%、23.81%和19.05%。Carba NP试验阳性菌株17株,均携带blaNDM-1基因,其余4种基因检测均为阴性。MLST显示21株菌株共有9种ST型别,其中携带blaNDM-1基因的大肠埃希菌主要为ST167型和ST540型。PFGE显示来自泌尿外科的3株菌株电泳图谱完全相同,另外来自不同病房的2株菌株电泳图谱也完全相同,提示医院内存在同一克隆菌株传播的可能。结论 该医院碳青霉烯耐药大肠埃希菌基因型分布呈现多态性;对碳青霉烯类药物耐药的机制主要是携带blaNDM-1基因;携带该基因的大肠埃希菌对临床常用抗菌药物往往呈现多重耐药,给临床治疗带来了困难。加强对碳青霉烯耐药菌株基因型和耐药基因的检测,将对减缓或阻断耐药菌的传播具有重要意义。
关键词: 碳青霉烯耐药, 大肠埃希菌, 碳青霉烯酶, 脉冲场凝胶电泳, 多位点序列分型
2005年中国El Tor霍乱弧菌流行优势菌株分子特征分析
王洪霞, 逄波, 周海健, 刁保卫, 张京云, 崔志刚, 阚飙
2009,24(5) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.05.007
目的研究2005年中国霍乱弧菌流行优势菌株的分子特征。方法使用脉冲场凝胶电泳对菌株进行聚类分析,使用PCR和序列测定的方法对特异片段进行扩增和序列分析的研究。 结果2005年中国霍乱弧菌流行优势菌株的脉冲场凝胶电泳图谱高度一致并且不同于以往分离的菌株;这些菌株的VSPⅡ(IVibrio/I seventh pandemic island-Ⅱ)区域有相同的由插入序列的插入导致的基因缺失。 结论2005年霍乱弧菌流行优势菌株是一种首次报道的、由VSP-Ⅱ突变菌株引起流行的菌型,其扩散能力较强,应该在今后霍乱的监测中引起注意。
关键词: 霍乱弧菌, 脉冲场凝胶电泳, 插入序列, 突变, 监测
中国脑膜炎奈瑟菌nadA基因多态性分析
孙晓芳, 杨郝亮, 周海健, 朱兵清, 徐丽, 高源, 邵祝军
2012,27(11) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2012.11.003
目的 了解我国脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)主要黏附蛋白(Neisseria adhesion A,NadA)编码基因nadA的多态性特征,以期研究我国主要流行Nm菌株NadA蛋白的流行病学意义及NadA蛋白作为脑膜炎球菌蛋白疫苗候选蛋白研发的可行性。 方法 选取我国26个省(市、自治区)1963-2012年间不同血清群代表性Nm菌株230株,采用多位点序列分型(muliti-locus sequence typing,MLST)、PCR、斑点杂交、基因测序等方法,检测Nm菌株基因型特征、nadA基因分布的多态性及其基因序列特征,利用BioEdit、Mega 4.0等软件对nadA基因序列进行比对分析。 结果 我国230株不同血清群的Nm菌株中,nadA+菌株55株,仅存在于ST-5 complex(序列群)的A群和ST-11 complex 的W135群Nm菌株中,B、C及其他血清群Nm菌株nadA-。nadA+菌株基因型以variant 3(V3)型为主(54/55),包括5种亚型(NadA V3.1~3.5),同源性高达99%以上。 结论 我国Nm菌株中,仅ST-5 complex的A群和ST-11 complex的W135群菌株存在NadA黏附蛋白,型别以variant 3型为主。B群菌株不含有NadA蛋白,variant 3型NadA蛋白不适合作为我国B群Nm(B meningococci,MenB)蛋白疫苗的候选蛋白。
关键词: 脑膜炎奈瑟菌, nadA, 黏附蛋白, 疫苗
利用脉冲场凝胶电泳筛选质粒方法的建立和应用
关红, 秦天, 周海建, 任红宇, 段永翔, 许欣, 邵祝军
2013,28(1) . doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2013.1.018
目的 改良及优化常规脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)方法,建立基于PFGE技术筛选细菌质粒方法,并用于军团菌质粒的筛选。 方法 使用含有质粒的杜莫氏军团菌及其质粒消除株对常规PFGE方法进行条件优化,调整细菌菌悬液浓度,蛋白酶K用量及作用时间,胶块清洗时间和次数,胶块不经过酶切直接进行PFGE,染色成像后选择能形成条带清晰脱尾较少的最优条件。 结果 去除常规PFGE方法中酶切步骤并优化裂解和清洗条件能使细菌DNA完整保留在胶块中,经过PFGE后,质粒DNA和染色体DNA在琼脂糖凝胶上能被很好的区分。 结论 该方法较常规方法更为快速可靠,可用于细菌质粒图谱的快速筛选。
关键词: 质粒, 脉冲场凝胶电泳, 军团菌
脉冲场凝胶电泳和自动化核糖体分型方法用于 霍乱弧菌分子分型能力的比较
周海健, 张力, 韩辉, 刁保卫, 逄波, 章丽娟, 阚飙
2011,26(4) .
目的 比较脉冲场凝胶电泳(PFGE)和自动化核糖体分型两种方法对霍乱弧菌的分型能力。 方法 应用PFGE和自动化核糖体分型分析254株O1群和37株O139群霍乱弧菌,比较两种方法的分型力、分辨力和对暴发菌株的分析能力。 结果 PFGE将254株O1群和37株O139菌株分别分为211和21个型别,分型D值分别为0.9952和0.9339;自动化核糖体分型将同样的菌株分为101和10个型别,分型D值分别为0.9075和0.8033。PFGE和自动化核糖体分型均可以区分O1 群霍乱的暴发相关和不相关菌株。PFGE能够将不同起O139暴发来源的菌株分开,同时将相同暴发来源的菌株分为相同的型别;自动化核糖体分型不能完全区分不同起O139暴发来源的菌株,也不能将同起O139霍乱暴发来源的菌株分为相同的型别。 结论 在霍乱弧菌分型方面,PFGE和自动化核糖体分型方法均具有相同的分型力,但PFGE具有更高的分辨力和更好的暴发菌株分析能力。自动化核糖体分型方法在霍乱暴发调查中具有局限性,更适合用于菌株鉴定。
关键词: 脉冲场凝胶电泳, 自动化核糖体分型, 分子分型, 霍乱弧菌
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