五种常用轮状病毒检测方法的评价及应用策略

罗明 龚成 史玲莉 吴疆 张合润 王玉梅 高志勇 黄芳

罗明, 龚成, 史玲莉, 吴疆, 张合润, 王玉梅, 高志勇, 黄芳. 五种常用轮状病毒检测方法的评价及应用策略[J]. 疾病监测, 2014, 29(3): 223-227. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.015
引用本文: 罗明, 龚成, 史玲莉, 吴疆, 张合润, 王玉梅, 高志勇, 黄芳. 五种常用轮状病毒检测方法的评价及应用策略[J]. 疾病监测, 2014, 29(3): 223-227. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.015
LUO Ming, GONG Cheng, SHI Ling-li, WU Jiang, ZHANG He-run, WANG Yu-mei, GAO Zhi-yong, HUANG Fang. Evaluation on performance of five routine rotavirus detection assays and application strategies[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(3): 223-227. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.015
Citation: LUO Ming, GONG Cheng, SHI Ling-li, WU Jiang, ZHANG He-run, WANG Yu-mei, GAO Zhi-yong, HUANG Fang. Evaluation on performance of five routine rotavirus detection assays and application strategies[J]. Disease Surveillance, 2014, 29(3): 223-227. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.015

五种常用轮状病毒检测方法的评价及应用策略

doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2014.03.015

Evaluation on performance of five routine rotavirus detection assays and application strategies

  • 摘要: 目的 比较胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gelelectrophoresis,PAGE)5种常用的轮状病毒检测方法的准确性。方法 取A组轮状病毒阳性标本,经1101~1108 10倍系列稀释,采用上述5种方法平行检测,比较检测限;选择分别含有以下9种病原体且轮状病毒证实为阴性的粪便标本作为阴性对照:脊髓灰质炎病毒疫苗株Ⅰ~Ⅲ型、肠道病毒EV71、柯萨奇病毒A16、ECHO病毒6、诺如病毒Ⅰ型、诺如病毒Ⅱ型和星状病毒,采用上述5种方法平行检测,比较特异性;采用上述方法,分别对184例婴幼儿腹泻粪便标本进行检测,以PAGE检测结果作为参考标准,比较其余4种方法的灵敏度和特异性。结果 上述5种方法检测A组轮状病毒的检测限相差5个数量级,分别为:real-time RT-PCR法10-6稀释度,胶体金法10-3稀释度,ELISA和PAGE方法均为10-2稀释度,RT-PCR法10-1稀释度;5种方法对9种对照病原体均无交叉反应;以PAGE方法检测结果作为标准,real-time RT-PCR、 ELISA、胶体金和RT-PCR灵敏度分别为95.45%、96.97%、93.94%和62.12%,特异性分别为82.2%、86.44%、82.20%和94.07%。结论 PAGE作为检测轮状病毒的经典方法,具有高特异性,可用于确认实验;real-time RT-PCR方法检测A组轮状病毒的灵敏度优于其他4种方法,可用于轮状病毒的高通量检测;ELISA和胶体金方法具有良好的灵敏度与特异性,且胶体金方法成本低,可用于初筛检测;行业标准推荐的RT-PCR方法特异性较高,但灵敏度较低,有待改进。
  • [1] WiddowsonMA,SteeleD,VojdaniJ,etal.Globalrotavirussurveillance:determiningtheneedandmeasuringtheimpactofrotavirusvaccines[J].JInfectDis,2009,200(Suppl1):S1-8.
    [2] NelsonEA,BreseeJS,ParasharUD,etal.Rotavirusepidemiology:theAsianRotavirussurveillancenetwork[J].Vaccine,2008,26(26):3192-3196.
    [3] LiF,LiuJX.MedicalMicrobiology[M].Version7.Beijing:People'sMedicalPublishingHouse,2008.(inChinese)李凡,刘晶星.医学微生物学[M].7版.北京:人民卫生出版社,2008.
    [4] ChineseCenterForDiseaseControlAndPrevention.Anunalreportonsurveillanceofselectedinfectiousdiseasesandvectors,China[R].Beijing:ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,2010.(inChinese)中国疾病预防控制中心.中国重点传染病和病媒生物监测报告[R].北京:中国疾病预防控制中心,2010.
    [5] ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention.SurverllianceprocedureofviraldiarrheaofChina[S].Beijing:ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,2007.(inChinese)中国疾病预防控制中心.全国病毒性腹泻监测方案[S].北京:中国疾病预防控制中心,2007.
    [6] MinistryofHealthofthePeople'srepublicofChina.WS271-2007Diagnosticcriteriaforinfectiousdiarrhea[S].Beijing:MinistryofHealthofthePeople'srepublicofChina,2010.(inChinese)中华人民共和国卫生部.WS2712007感染性腹泻诊断标准[S].北京:中华人民共和国卫生部,2008.
    [7] HerringAJ,InglisNF,OjehCK,etal.Rapiddiagnosisofrotavirusinfectionbydirectdetectionofviralnucleicacidinsilver-stainedpolyacrylamidegels[J].JClinMicrobiol,1982,16(3):473-477.
    [8] RossJ,OstlundEN,CaoD,etal.AcrylamideconcentrationaffectstherelativepositionofVP7geneofserotypeG2strainsasdeterminedbypolyacrylamidegelelectrophoresis[J].JClinVirol,2008,42(4):374-380.
    [9] WuBK,XiangHM.Real-timeRT-PCRtestonrotavirusofgroupAininfants.[J].LaboratoryMedicine,2009,24(5):388-390.(inChinese)吴炳坤,项红梅.荧光定量逆转录聚合酶链反应检测婴幼儿粪便A组轮状病毒[J].检验医学,2009,24(5):388-390.
    [10] YanHQ,ZhangQ,CuiSX,etal.ApplicationandComparisonoftwodetcetionmethordsonrotavirusofgroupA[J].ChineseJournalofExperimentalandClinicalVirology,2009,23(2):157.(inChinese)严寒秋,章青,崔淑娴,等.两种检测A组轮状病毒方法的应用比较[J].中华实验和临床病毒学杂志,2009,23(2):157.
    [11] XuYY,WeiXS,ZhangSQ,etal.Evaluationandselectionstrategyofdetectionreagentsonrotavirusantigen[J].InternationalJournalofLaboratoryMedicine,2005,26(10):757-758,760.(inChinese)徐育云,魏祥松,张双庆,等.轮状病毒抗原检测试剂的评价及选用策略[J].国外医学:临床生物化学与检验学分册,2005,26(10):757-758,760.
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  • 收稿日期:  2013-09-09
  • 刊出日期:  2014-03-20

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