基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌

高瑞红 曹阳 闫梅英

高瑞红, 曹阳, 闫梅英. 基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌[J]. 疾病监测, 2016, 31(6): 507-511. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.015
引用本文: 高瑞红, 曹阳, 闫梅英. 基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌[J]. 疾病监测, 2016, 31(6): 507-511. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.015
GAO Rui-hong, CAO Yang, YAN Mei-ying. Detection of Salmonella Choleraesuis with single gene-based real time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction[J]. Disease Surveillance, 2016, 31(6): 507-511. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.015
Citation: GAO Rui-hong, CAO Yang, YAN Mei-ying. Detection of Salmonella Choleraesuis with single gene-based real time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction[J]. Disease Surveillance, 2016, 31(6): 507-511. doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.015

基于单基因的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应定性检测猪霍乱沙门菌

doi: 10.3784/j.issn.1003-9961.2016.06.015
基金项目: 

国家科技重大专项(No.2013ZX10004216)

国家重点基础研究发展计划项目(No.2013CB127204)

Detection of Salmonella Choleraesuis with single gene-based real time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction

Funds: 

This study were supported by the fund for National Science and Technology Major Project of China (No.2013ZX10004216) and the National Basic Research Program of China (No. 2013CB127204)

  • 摘要: 目的 建立基于单基因的猪霍乱沙门菌的实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法。方法 通过对猪霍乱沙门菌基因组及其他血清型沙门菌基因组、人类基因组的生物信息学比对及普通PCR检测分析,获得猪霍乱沙门菌特有而其他细菌及人类基因组中不存在的特异基因SC 1242,针对该基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用123株多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株RNA评价该方法的特异性及敏感性。同时对猪霍乱沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果 利用该方法检测20株猪霍乱沙门菌均为阳性,其余菌株均扩增阴性。对纯菌RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限度为50 fg/反应,约为96个拷贝/反应。在以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达90 cfu/ml。结论 rRT-PCR方法检测猪霍乱沙门菌特异性好、灵敏度高,对猪霍乱沙门菌的早期诊断具有潜在应用价值。
  • [1] ChiuCH,SuLH,ChuC.SalmonellaentericaserotypeCholeraesuis:epidemiology,pathogenesis,clinicaldisease,andtreatment[J].ClinMicrobiolRev,2004,17(2):311-322.
    [2] ChiuCH,ChuangCH,ChiuS,etal.Salmonellaentericaserotypecholeraesuisinfectionsinpediatricpatients[J].Pediatrics,2006,117(6):e1193-1196.
    [3] AoTT,FeaseyNA,GordonMA,etal.GlobalburdenofinvasivenontyphoidalSalmonelladisease,2010[J].EmergInfectDis,2015,21(6):941-949.
    [4] FeaseyNA,DouganG,KingsleyRA,etal.Invasivenon-typhoidalSalmonelladisease:anemergingandneglectedtropicaldiseaseinAfrica[J].Lancet,2012,379(9835):2489-2499.
    [5] ZhangZH,PengMJ,ChenJ.Distributionandantibioticsusceptibilityofpathogensisolatedin34casesofchildrensepticemia[J].SichuanMedicalJournal,2011,32(6):838-841.(inChinese)张洲慧,彭珉娟,陈娟.34例儿童败血症病原菌及耐药性分析[J].四川医学,2011,32(6):838-841.
    [6] YuF,LiangFL,DengMH,etal.Surveyofclinicalfeaturesandpathogensof44AIDSpatientscomplicatedwithsepticemia[J].ChinaTropicalMedicine,2012,12(8):967-969.(inChinese)余丰,梁飞立,邓梅花,等.艾滋病合并败血症44例临床特点和病原菌分析[J].中国热带医学,2012,12(8):967-969.
    [7] PopoffMY,LeMinorL.AntigenicformulasoftheSalmonellaserovars[M].6threved.Paris:InstitutePasteur,1992.
    [8] ZhuC,XuXB.SerologicaldiagnosisofSalmonella-species[M].Shanghai:TongjiUniversity,2009.(inChinese)朱超,许学斌.沙门菌属血清型诊断[M].上海:同济大学出版社,2009.
    [9] ChenDS,GuoWZ,XuZW,etal.IsolationandidentificationofSalmonellaCholeraesuisandtheestablishmentofitsPCRdetectivemethod[J].JournalofAnhuiAgriculturalSciences,2007,35(20):6020-6023.(inChinese)陈弟诗,郭万柱,徐志文,等.猪霍乱沙门菌的分离与鉴定以及PCR检测方法的建立[J].安徽农业科学,2007,35(20):6020-6023.
    [10] LinYM,ShiXL,ZhuYM,etal.Thedevelopmentandapplicationofreal-timePCRassaybasedonmodifiedmolecularbeaconfortherapiddetectionofSalmonellaparatyphiCandSalmonellaCholeraesuis[J].JournalofTropicalMedicine,2012,12(2):168-171.(inChinese)林一曼,石晓路,朱玉梅,等.实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用[J].热带医学杂志,2012,12(2):168-171.
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  • 收稿日期:  2016-01-04
  • 刊出日期:  2016-06-20

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